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精細胞を用いた新しい遺伝子導入動物作成法の開発

开发利用精子细胞创造转基因动物的新方法

基本信息

批准号：
09780784
负责人：
小倉淳郎
金额：
$ 1.47万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、精細胞を用いて効率的に遺伝子導入動物を作成する方法を開発しようとするものである。動物は主にマウスを用いている。この目的のために、(1)精細胞への遺伝子導入→(2)精細胞の体外あるいは体内培養→(3)精細胞の回収→(4)遺伝子導入精子細胞選抜および顕微授精→(5)遺伝子導入産子の出産、という一連の技術の開発が必要である。昨年度までに、精細胞の遺伝子導入および体外培養については、ある程度の成果を得た。本年度は、遺伝子導入細胞の選抜と顕微授精を成功させるための技術開発を行った。これまでの円形精子細胞を用いた顕微授精は、卵子活性化45分後から60分後までの分後までの短時間に終了させる必要があった。そこで、2減数分裂中期で停止している未受精卵へ円形精子細胞を注入し、染色体凝集をさせた後に、サイトカラシン存在下で活性化し、1個の雌性前核を除くことで二倍体胚を作成した。この胚は胚移植後に正常産子まで発生した。この方法により、(GFP) Green Fluorescent Proteinなどのマーカーをもとに導入細胞を探す時間的余裕ができ、より確実に遺伝子導入細胞由来の産子を得られると考えられる。本年度は、さらに核移植技術を用いて、精祖細胞由来のクローン胚の作成を目指した。生後6-8日令の雄マウ.スから精巣を取り出し、精細管を酵素処理することにより精祖細胞を採取し、Wakayama et al.の方法によりクローン胚を作成した。これまで120個の胚を培養し、36個(30%)が桑実期胚/胚盤胞期胚へ発生し、そのうち23個(77%)が着床した。精祖細胞は、精母細胞や精子細胞に比べて培養が容易であるので、遺伝子導入と選抜も実施できる可能性が高い。今後、本研究で得られた成果をもとに、実際に遺伝子導入動物の作成を実施する予定である。

In this study, the whole body of the animal was used to make a method to improve the quality of the animal in this study. The main body of the animal is used for the first time. The purpose of this study is to: (1) the sperm cells are introduced into the sperm cells; (2) the sperm cells are cultured in vitro and in vivo; (3) the sperm cells are returned to the sperm cells; (4) the sperm cells are introduced into the sperm cells. (5) the sperm is introduced into the sperm cells. In the past year, the results of the in vitro culture and the degree of success have been improved. This year, we have selected the successful microinsemination program for the selection of successful microinsemination programs. After 45 minutes of egg activation and 60 minutes of egg activation, the sperm cells were subjected to the necessary fertilization for a short period of time. In the second and second metaphase of meiosis, the unfertilized eggs were injected with sperm cells, the chromosomes were agglutinated, the embryos were activated, and one female pronucleus was removed and the diploid embryos were made. After embryo transfer, normal embryos were born after embryo transfer. Check the method, (GFP) Green Fluorescent Protein to check the margin of the time it takes to enter the cell, and make sure to make sure that the cell is loaded because of the origin of the test. This year, the technology of nuclear transfer has been used for the purpose of nuclear transfer. From the 6th to 8th day after his birth, he was ordered to become a hero. The essence is extracted, the enzyme in the sperm tube is processed, the cell is extracted, and the Wakayama et al. The method was used to make the embryo into a piece of cake. 120 embryos were cultured, 36 (30%) embryos were in morula