造精細胞を用いた顕微受精に関する発生工学的研究

生精细胞微受精的发育工程研究

• 批准号: 06780710
• 负责人: 小倉 淳郎
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: 国立予防衛生研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780710/
• 关键词: 顕微授精; 核移植; 精細胞; 発生工学; 電気融合

1.円形精子細胞による顕微授精技術およびその産子作出法の改良円形精子細胞は、精子と同じ半数体の染色体を有しており、これを成熟卵子と電気融合させることにより、産子が得られることをマウスで明らかにしているが、融合率(受精率)は25%程度であった。本研究では、電気融合法よりも効率的である卵子細胞質内注入法を応用できるか検討を行った。その結果、細胞膜を侵襲せずに破ることを可能にするピエゾマニピュレーター(プリマハム製)の使用および顕微操作ステージを17-18℃に冷やすことが有効であることが判明し、これにより、卵子生存率80-90%、受精率70%という、電気融合よりもはるかに効率的な方法として確立された。現在、得られた胚の卵管への移植実験を行っている。これらの顕微授精技術を他の動物に応用する場合、円形精子細胞の確認が重要となる。このために、第二減数分裂間期で停止させたハムスターあるいはマウス卵子へ細胞を注入し、その染色体を検査する、という方法を確立した。これにより、モルモットの円形精子細胞がマウスなどに比べ、きわめて大型であることを確認した。2.精母細胞による顕微授精技術およびその産子作出法の開発精母細胞は、減数分裂前の四倍体の細胞である。そこで、これらを同じ四倍体である卵母細胞と授精させ、減数分裂、そして発生をさせることを検討した。卵母細胞は卵丘細胞と透明帯に硬く囲まれているが、酵素と酸性溶液処理により、これらを効率的に取り除けることが明らかになった。現在、電気融合法と卵子細胞質内注入法のどちらが良いか、検討中である。また、他の方法として、精母細胞を体外で円形精子細胞まで培養し、これを顕微授精に用いる技術の開発も行った初代培養、あるいは株化したセルトリ細胞いづれを共培養に用いても、精母細胞が円形精子細胞まで発生することを明らかにした。現在、このようにして得られた円形精子細胞が、子供に至るかどうか、検討中である。

1. The sperm cells were micro-inseminated and the sperm cells were fused with the same chromosomes. The fusion rate (fertilization rate) was 25%. In this study, the method of intracytoplasmic injection was used to investigate the effect of electrofusion. The results, cell membrane invasion, and the use of micro-manipulation methods at 17-18 ° C were determined. The egg survival rate was 80-90%. The fertilization rate was 70%. Now, the embryo and egg tube transplantation are carried out. The identification of sperm cells is important in the application of micro-insemination techniques in other animals. The second meiotic interphase was stopped, and the method of chromosome detection was established. The sperm cells in the sperm cells were identified as large and small. 2. Spermatocyte micro-insemination technology and the development of spermatocytes and tetraploid cells before meiosis Oocyte insemination, meiosis, reproduction Oocytes are treated with a transparent medium and an acidic medium. Now, the electric fusion method and the egg cytoplasmic injection method In addition, other methods for the development of spermatocytes in vitro culture of sperm cells, microinsemination techniques, primary culture, and co-culture of sperm cells, and the development of spermatocytes in vitro culture of sperm cells, are described. Now, the sperm cells are in the shape of a circle, and the sperm cells are in the shape of a circle.