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生殖細胞の分化全能性獲得過程におけるクロマチン修飾因子の作用機構解析

生殖细胞全能性获得过程中染色质修饰剂的机制分析

基本信息

批准号：
07F07581
负责人：
小倉淳郎
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

哺乳動物では一部の遺伝子の刷り込み(ゲノミック・インプリンティング)によって父親由来のゲノムと母親由来のゲノム間に機能的な差が存在することが知られている。このためゲノムが父親由来か母親由来かを記憶するインプリントメモリーは、生殖細胞が受精によって分化全能性を獲得する過程においても維持されなければならない。以前からインプリントメモリーの維持には制御領域のDNAメチル化が重要であることが知られているが、近年の報告によってアレル特異的なヒストン修飾の関与もあきらかになってきた。生殖補助医療による出生児において、Angelman症候群やBeckwith-Wiedermann症候群等のインプリンティング異常症の頻度が高いことが報告されていることや、個体におけるインプリント状態が受精直後に決定されることから、受精後なるべく早い段階でのDNAメチル化やアレル特異的ヒストン修飾を調節するクロマチン修飾因子の作用機構を解析する必要性が生じている。しかし、ヒストン修飾の解析に用いるクロマチン免疫沈降法が、一定数以上の細胞を必要としていたため、細胞数の少ない受精卵におけるアレル特異的ヒストン修飾の解析は困難とされてきた。そこで、前年度までの研究結果によって確立された高感度クロマチン免疫沈降法を用いて、マウス系統間塩基配列多型が多く見られるC57BL/6系統とJF1系統マウスを掛け合わせて作成した受精卵の、インプリンティング調節領域(ICR)におけるアレル特異的ヒストン修飾状態の解析を行った。4細胞期、桑実胚期、胚盤胞期の受精卵を回収した後、抗ヒストンメチル化、アセチル化、変異体ヒストン抗体で免疫沈降し、アレル間の偏りをSingle-Strand Conformation Polymorphism法を用いて調べた結果、1)マウス受精卵のICRにおけるヒストン修飾にゲノムの親由来による違いが存在すること、2)転写抑制的ヒストン修飾であるDimethylヒストンH3 lysine 9が、受精卵のインプリンティング調節領域においてゲノムの親由来の識別に関与していることを示唆する実験結果を得た。本研究によって得られた知見は、インプリントメモリーの維持機構の解明に貢献する事が期待される。

mammals The origin of the father is the difference between the function of the mother and the origin of the mother.このためゲノムがfather's origin かmother's origin かをMemory するインプリントメモリーは, reproductive cells The process of cell fertilization, differentiation, and differentiation of totipotency is the acquisition and maintenance of totipotency. In the past, it was important to maintain the control domain and maintain the DNA of the DNA program.れているが, in recent years, によってアレル's special なヒストンmodification and もあきらかになってきた. Reproductive subsidy medical care, birth control, Angelman syndrome, Beckwith-Wiederm ann syndrome and other abnormal syndromes, frequency report, individual report, high frequency reportインプリント status がAfter fertilization, it is decided されることから, after fertilization なるべくEarly step stage でのDNA メチル化やThe specific ヒストン modification of アレル regulates the action mechanism of するクロマチン modification factor and analyzes the necessity of する生じている. The immunoprecipitation method is used for the analysis of しかし and ヒストン modifications. It is necessary to use a certain number of cells or more.いたため、The number of cells is small and the fertilized egg is におけるアレルThe specific ヒストン modification is difficult to analyze とされてきた.そこで、The research results of the previous year までのによって established that されたhigh sensitivity クロマチンimmunoprecipitation The multi-type multi-type が多く见られるC57BL/6 system between the いて and マウス systems of the falling methodとJF1 system マウスを合け合わせて成した Fertilized eggの、インプリンティングAdjustment field (ICR) におけるアレルspecific ヒストン modification status のanalytic を行った. After the fertilized egg is recovered at the 4-cell stage, morula stage and blastoderm stage, it is resistant to sterilization and sterilization. Chemical, allogeneic ヒストン antibody and immunoprecipitation し, アレル马のbiased りをSingle-Strand Conformation Polymorphism method is used to adjust the result of いて and べた, 1) マウス Fertilized egg のICR におけるヒストン modified にゲノムの Kin origin によるviolation いが existence すること, 2) 転WRITE-inhibited ヒストン modification であるDimethylヒストン H3 lysine 9が, fertilized egg regulation field regulation field regulation The identification of the origin of the parent is related to the result of the identification. This research is based on the understanding and understanding of the organization, and the contribution and expectation of the organization's maintenance.