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培養精子細胞および精母細胞を用いた顕微受精と産子の作出に関する発生工学的研究

利用培养精子细胞和精母细胞进行微受精和后代生产的发育工程研究

基本信息

批准号：
08780808
负责人：
小倉淳郎
金额：
$ 0.64万
依托单位：
国立予防衛生研究所
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780808/
关键词：
精子細胞精母細胞顕微授精マウス

项目摘要

本研究は、顕微授精技術を遺伝子導入動物作成や雄性不妊治療(野生動物、ヒト)への応用のために、精子細胞以前の精祖細胞(二倍体)や一次精母細胞(四倍体)の利用を目指したものである。そこで、1)精祖細胞あるいは一次精母細胞を精子細胞まで体外で培養する、あるいは2)一次精母細胞を直接顕微授精に用いる、の2点について研究を進めた。動物はいずれもマウスを用いた。1)精細胞培養技術の確立:生後10日令の雄マウスより精細胞を取り出し、1-2週間セルトリ細胞を含む精巣細胞と共培養した。この日令のマウスは、まだ精子細胞は発生していないので、培養後に円形精子細胞が観察されれば、これらはすべて体外で発生したものと考えられる。F12培養液にエピネフリンを添加することで、円形精子細胞が発生した。これらは、未受精卵子へ注入することにより、1Nの半数体染色体を観察することにより確認できた。よって、少なくとも第一減数分裂と第二減数分裂を連続的に体外で進ませることが可能になった。2)一次精母細胞による顕微授精技術の開発:a)四倍体の一次精母細胞核を未受精卵に注入し、時間をおいて卵子を発生させることにより、染色体を1/2にする。これを取り出し、同じことをもう一度行うことにより、染色体を1/4(すなわち精子と同じ半数体)にし、胚として発生させた。あるいは、b)同じ四倍体である卵母細胞と授精させ、減数分裂を終了させることにより、胚として発生させた。前者の方法は、染色体の形態的ダメ-ジがあったが、後者の方法では、正常な二倍体胚を得られることが明らかになった。しかし、胚盤胞まで発生した胚を偽妊娠マウスへ移植したが、産子は得られなかった。以上から、減数分裂前の一次精母細胞も顕微授精に用いられることが示された。

This study is based on the use of microinsemination technology in the treatment of male infertility (wild animals, fertilization) by introducing fertilized seeds into animals.に. The purpose of using sperm cells is to refer to sperm progenitor cells (diploid) and primary spermatocytes (tetraploid).そこで, 1) Sperm progenitor cells あるいは Primary spermatocytes を Sperm cells まで Culture in vitro する, あるいは2) Direct microinsemination of primary spermatocytes was carried out using いる and の2-point について research was carried out. Animal はいずれもマウスを Use いた. 1) Establishment of sperm cell culture technology: On the 10th day after birth, male sperm cells are collected and extracted, and male sperm cells are extracted and co-cultured between 1 and 2 weeks.この日日のマウスは, まだsperm cell は発生していないので, and cultured 円shaped sperm The daughter cells are in vitro and in vitro. F12 culture medium was added with することで and cylindrical sperm cells.これらは, unfertilized egg へinjection することにより, 1Nのhalf-body chromosome を観看することによりconfirmation できた.よって, 小なくともThe first meiosis and the second meiosis をEven the に in vitro でませることがpossible になった. 2) Development of primary spermatocyte microinsemination technology: a) Tetraploid primary spermatocyte nuclei are not fertilized The sperm and egg are injected, the time is the same, the egg is born, and the chromosome is 1/2.これを出り出し、同じことをもう一行うことにより、Chromosome を1/4(すなわちspermと同じhalf body)にし, embryoとして発生させた.あるいは, b) Isotetraploid であるoocyte とfertilization させ, meiosis をfinal させることにより, embryo として発生させた. The method of the former, the shape of chromosomes, the method of the latter, the normal diploid embryo, the shape of the chromosome, the shape of the chromosome, and the shape of the chromosome.しかし、blastoderm cells まで発生したEmbryo をpseudopregnancy マウスへtransplantation したが、childbirth られなかった. Above, the method of micro-insemination of spermatocytes before meiosis is shown in Figure 1.