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円形精子細胞を用いた産子の作出に開する発生工学的研究

圆形精子细胞产生后代的发育工程研究

基本信息

批准号：
05780640
负责人：
小倉淳郎
金额：
$ 0.77万
依托单位：
国立予防衛生研究所
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780640/
关键词：
発生工学精子細胞電気融合顕微受精

项目摘要

哺乳動物の精子は精巣内での減数分裂後、数日から数週間かけて形態変化、および成熟を遂げることにより初めて受精能を獲得する。しかし染色体レベルでは、すでに減数分裂直後の精子発生系列細胞、いわゆる円形精子細胞(round spermatid)の段階で、成熟精子同様同様、半数体となっており、個体発生に関与する能力を有するはずである。本研究は、この点に着目し、円形精子細胞の未受精卵への核移植により受精卵を構築し、産仔を得ることを目的としたのものである。この1年間の研究は、マウスの実験系を中心に進め、精巣からの円形精子細胞と成熟卵子を電気膜融合させることにより、受精卵を構築することに成功した。融合パルスの前後に高周波交流電流を流すことにより、融合(受精)率は、当初の10%から25%へ向上できた。また、構築胚用の培養液の改良(グルタミン添加、グルコース減量など)により、発生率の高めることが出来た。融合後20時間の培養で、90%が2細胞期に発生した。融合と非融合卵子を培養下で確認することは出来ないため(固定標本では可能)、非融合卵子を含む475個の処理卵子を8匹の偽妊娠雌の卵管に移植した。その結果、3匹が妊娠し、6匹の円形精子細胞由来の仔が生まれた(毛色により確認)。現在追試中で、85個を2匹の偽妊娠雌に移植し、1匹が妊娠していると思われる。本研究の結果より、精巣中の円形精子細胞も成熟精子と同様、卵子との受精後、個体を産出する能力を有することが初めて明らかにされた。この発見は、ヒト男性不妊の治療および新しい遺伝子導入動物作成法の開発を進める端緒となるであろう。

Mammalian spermatozoa undergo morphological transformation, maturation, and initial fertilization after meiosis, days, and weeks. Chromosome development series cells after meiosis, stage of round spermatid, identity of mature sperm, semisome, ability of individual development. The purpose of this study is to construct and reproduce unfertilized eggs from sperm cells. During the past year, the research on sperm cells and sperm cells has been successful. High frequency AC current flow before and after fusion, fusion (fertilization) rate from 10% to 25% upward The improvement of culture medium for embryo construction (such as addition and reduction of culture medium) can improve the survival rate. 90% of the cells developed at 2-cell stage 20 days after fusion. Fusion and non-fusion eggs were confirmed under culture, and non-fusion eggs were transferred from 475 processed eggs to 8 pseudo-pregnant females. The results were as follows: 3 pregnant and 6 round sperm cells were born (hair color was confirmed). In the current follow-up, 85 women were transplanted into 2 pseudo-pregnant females and 1 pregnant female. The results of this study make it clear that the rounded sperm cells in the sperm, like mature sperm, have the ability to produce eggs and eggs after fertilization. The development of new methods for introducing genetic material into animals is a major step forward in the treatment of male infertility.