円形精子細胞を用いた産子の作出に開する発生工学的研究

圆形精子细胞产生后代的发育工程研究

基本信息

批准号：
05780640
负责人：
小倉淳郎
金额：
$ 0.77万
依托单位：
国立予防衛生研究所
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780640/
关键词：
発生工学精子細胞電気融合顕微受精

项目摘要

哺乳動物の精子は精巣内での減数分裂後、数日から数週間かけて形態変化、および成熟を遂げることにより初めて受精能を獲得する。しかし染色体レベルでは、すでに減数分裂直後の精子発生系列細胞、いわゆる円形精子細胞(round spermatid)の段階で、成熟精子同様同様、半数体となっており、個体発生に関与する能力を有するはずである。本研究は、この点に着目し、円形精子細胞の未受精卵への核移植により受精卵を構築し、産仔を得ることを目的としたのものである。この1年間の研究は、マウスの実験系を中心に進め、精巣からの円形精子細胞と成熟卵子を電気膜融合させることにより、受精卵を構築することに成功した。融合パルスの前後に高周波交流電流を流すことにより、融合(受精)率は、当初の10%から25%へ向上できた。また、構築胚用の培養液の改良(グルタミン添加、グルコース減量など)により、発生率の高めることが出来た。融合後20時間の培養で、90%が2細胞期に発生した。融合と非融合卵子を培養下で確認することは出来ないため(固定標本では可能)、非融合卵子を含む475個の処理卵子を8匹の偽妊娠雌の卵管に移植した。その結果、3匹が妊娠し、6匹の円形精子細胞由来の仔が生まれた(毛色により確認)。現在追試中で、85個を2匹の偽妊娠雌に移植し、1匹が妊娠していると思われる。本研究の結果より、精巣中の円形精子細胞も成熟精子と同様、卵子との受精後、個体を産出する能力を有することが初めて明らかにされた。この発見は、ヒト男性不妊の治療および新しい遺伝子導入動物作成法の開発を進める端緒となるであろう。

哺乳动物的精子仅在睾丸中减数分裂后才能获得生育能力，在几天到几周内经历形态学变化和成熟。然而，在染色体水平上，它已经处于精子发育细胞的阶段，圆形的精子，仅在减数分裂后，并且具有单倍体形式，就像成熟的精子一样，并且应该有能力参与Ontumour。这项研究的重点是这一点，旨在通过将圆形精子细胞核转移到未施用的卵并获得受精卵来构建受精卵。这项为期一年的研究集中在实验小鼠上，并通过用成熟的卵从睾丸中圆形精子细胞的电膜融合成功地构建了受精卵。通过在融合脉冲之前和之后通过高频交替电流，融合（受精）速率从最初的10％提高到25％。此外，改善构建胚胎的培养基（包括添加谷氨酰胺，葡萄糖体重减轻等）可以增加发病率。在融合后20小时的培养中，在两个细胞阶段发生了90％。由于无法在培养物下（可能在固定标本中）确认融合和非融合卵，因此将475个含有非融合卵的卵子植入了八个伪久的女性的输卵管中。结果，三个怀孕，六只幼崽诞生了圆形精子细胞（通过外套颜色确认）。目前正在进行重新测试，其中85例已移植到两名伪孕妇中，其中一名被认为是怀孕的。这项研究的结果表明，睾丸中的精子（如成熟的精子）首次具有在用卵子受精后产生个体的能力。这一发现将标志着开发新方法的开发，用于创造新的转基因动物，包括对人类不孕症的治疗。