口腔細菌検出・同定用リコンビナント植物抗体の開発

用于检测和鉴定口腔细菌的重组植物抗体的开发

• 批准号: 12771101
• 负责人: 矢野 明
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12771101/
• 关键词: 植物抗体; タバコ培養細胞; マウスFab; 分泌シグナル; Fab; リコンビナント抗体

これまでにタバコ培養細胞BY-2及びXD6SにマウスFab cDNAを導入した形質転換株をいくつか得ている。ELISA法をもちいて生産性の高い細胞をスクリーニングしそれぞれ数ラインずつ液体培養するとともに、平板培地上に抗体産生植物細胞を維持している。植物由来分泌シグナルをFab L-chain及びH-chainのN末端に付加する形質転換ベクターを作成し、それらを用いて組換え体を作成、それぞれ活性をもったマウス型Fab抗体を産生していることを確認した。現在さらに詳細な解析を行うために大量の抗体を精製する作業を進めている。Fc部分を持たないためProteinAによる精製は行えないが、6xHis-TagをC-末端に付加してあるため、ニッケルカラムによる精製が可能である。またFabの細胞内、細胞壁内、及び細胞外の分布状況を予測するために、分泌シグナルを付加したGFPを産生する細換え体の作成も行った。分泌シグナルを持たないもの、植物の分泌シグナルを付加したものをそれぞれ作成したところ、シグナルのないGFPは細胞質に少量が蓄積していること、各分泌シグナルを付加したものは細胞壁中および培地中に多くGFPの螢光が見られる事を確認した。現在これらの結果を発表するための準備を進めており、来年度中には誌上報告できる予定である。

The Fab cDNA of BY-2 and XD6S was introduced into the cultured cells. ELISA method for the production of high-level cells, such as cell culture, plate culture, antibody-producing plant cells, maintenance Plant origin and secretion of Fab L-chain and H-chain N-terminal binding protein Now we have a lot of antibody purification work to do. Fc part: ProteinA, 6xHis-Tag, C-terminal, addition, refinement, possible. To predict the intracellular, intracellular, and extracellular distribution of Fab, to increase the production of GFP, and to create a new cell. Secretion of the cell wall, plant secretion of the cell wall, GFP accumulation in small amounts, confirmed. The results are now available for review, and reports are scheduled for the coming year.