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生体分子モーターF1におけるATPase反応と力学反応の同時計測

同时测量生物分子马达F1中的ATP酶反应和机械反应

基本信息

批准号：
12780490
负责人：
齋藤究
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780490/
关键词：
ATP合成酵素 1分子計測近接場光学モーター蛋白質

项目摘要

モータータンパク質分子であるATP合成酵素F1の動作メカニズムを解明するために、ATP加水分解反応と回転運動を1分子レベルで同時観察する事を試みた。現在所有するエバネッセント場照明蛍光顕微鏡では、蛍光色素1分子の水溶液中、実時間観察が可能である。蛍光性ATPアナログ、Cy3-ATPを使うことにより、カバーガラス表面上に固定した1分子のF1によるATP加水分解反応を観察した。ガラス表面上に輝点として観察されるCy3-ATPの密度はガラス表面に固定したF1の濃度に比例した。また、Cy3-ATPの結合解離の時定数を調べてみると、溶液中の計測から報告されている時定数と良い一致を示した。以上の二つの点は、ATP合成酵素F1による1分子化学反応が可視化されたことを示している。遺伝子工学の手法で作成した大腸菌のF1を使って、F1の回転運動観察実験を行った。F1中央のγサブユニットにストレプトアビジンを介して蛍光標識したアクチンフィラメントを結合させた。溶液中にATPを入れることにより、アクチンフィラメントの回転を観察した。ATP加水分解に伴うエネルギーを考える上では、分解産物であるADPとリン酸の濃度が大きく影響する。F1のATP加水分解反応を計測する際、溶液中のADP及びリン酸の濃度を変えてATP加水分解反応速度を計測し、ADP及びリン酸による阻害の効果について情報を得た。次年度以降は、ATP加水分解反応観察系、回転運動観察系で得られる同時観察データと、本年度に得られた生化学的なデータを組み合わせ、化学反応と力学反応の同時観察に迫り、F1の物理化学的な特性に迫りたい。

The action of ATP synthase F1 in the molecule of ATP is studied. Now it is possible to detect all the molecules in aqueous solution under field illumination and fluorescence microscopy. Optical ATP degradation, Cy3-ATP degradation, ATP hydrolysis, ATP degradation, ATP degradation The density of Cy3-ATP on the surface of the glass is proportional to the concentration of F1 fixed on the surface of the glass. The timing of binding and dissociation of Cy3-ATP was adjusted and the timing of measurement in solution was reported to be consistent. The above two points are related to ATP synthase F1 and molecular chemical reaction. The method of gene engineering is to make the F1 of E. coli and to observe the movement of F1. F1 Center's γ- The solution contains ATP, and the solution contains ATP. The hydrolysis of ATP is accompanied by a large amount of oxygen, but the concentration of ADP and citric acid, the decomposition products, is greatly affected. When ATP hydrolysis reaction of F1 is measured, the concentration of ADP and citric acid in solution is changed, and the reaction rate of ATP hydrolysis is measured. The information of ADP and citric acid resistance is obtained. In the next year, the system of ATP hydrolysis reaction, the system of reverse motion reaction and the system of simultaneous reaction were obtained. In this year, the system of biochemical reaction and the system of simultaneous reaction and the system of chemical reaction and mechanical reaction were obtained. The physical and chemical characteristics of F1 were obtained.