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1分子計測による小胞体内動的構造の解析

单分子测量分析内质网动态结构

基本信息

批准号：
17028045
负责人：
和田郁夫
金额：
$ 3.97万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

分泌系における新生タンパク質の動きの制御を理解するために、生細胞での内腔での1分子観察を検討した。これまでも、蛍光相関分光法(FCS)による解析は行ってきたが、FCSでは基本的に既存のモデルへのfittingによる解析であり、個々の分子の動き自体は知ることができない。小胞体は細胞膜と結合したオルガネラなので、エバネッセント照明を用いる全反射顕微鏡による1分子観察が可能と考えて、観測を行った。その結果、生存時間の短い輝点が観測され、個々の輝点は、FCSで予測される拡散係数で変位することがわかった。生存時間も変位と相関するはずなので、これを一次元ブラウン運動と見なし、first passage time解析を行うと、この次元における拡散係数を得ることができ、この2次元とz軸方向の拡散係数を用いることで、小胞体内腔での個々の分子の動きについて解析することが可能となった。これらの手法を用いて、カーゴ蛋白の軌跡を解析したところ、N型糖鎖を持つ場合には、顕著な一時的な拘束が起こり、これは膜表面へのごく短時間の結合によることが示された。これは、フォールディングには依存せず、カルネキシンとは関係しない。現時点では、この受容体は明らかではないが、分泌タンパク質のうちの9割以上を占める糖タンパク質の分子間衝突の制御に関与する可能性が考えれる。これまで仮定されてきたように、多くの小胞体内カーゴ分子の変位は、ブラウン運動の特性を示した。しかし、一部は、flowの特性や、confined movementの特徴を持ち、その割合は分子の成熟化との関連において変化することが明らかにされた。このような研究により、これらの動きと、分子運命の関連、及び制御機構について研究を進めることが可能となった。

A molecular probe into the regulation of the secretion system in the growth and development of cells is discussed. This analysis is based on FCS, which is the fundamental analysis of existing molecular motion. The cell membrane is bound to the cell membrane, and the cell membrane is illuminated by a total reflection microscope. The results, survival time, and dispersion coefficient of the FCS were measured. Life time is dependent on the motion of the first element, the dispersion coefficient of the second element, the dispersion coefficient of the second element in the z-axis direction, and the motion of the first element in the small cell. The method is to analyze the trajectory of protein in the medium and the N type sugar lock in the medium and the short time. The relationship between the two sides is very close. The possibility of controlling intermolecular conflicts between sugar and protein is examined. This is the first time that a cell has been identified and the first time that a cell has been identified. A part of the flow characteristics, the characteristics of the confined movement, the maturity of the molecules and the relationship between the two. The study of molecular fate, molecular fate, and regulatory mechanisms

项目成果

期刊论文数量（10）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

CK2 phosphorylation of eukaryotic translation initiation factor 5 potentiates cell cycle progression

DOI：
10.1073/pnas.0506791102
发表时间：
2005-10-25
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Homma, MK;Wada, I;Homma, Y
通讯作者：
Homma, Y

Meltrin beta/ADAM19 Mediates Ectodomain Shedding of Neuregulin beta1 in the Golgi Apparatus : Fluorescence Correlation Spectroscopic Observation of the Dynamics of Ectodomain Shedding in Living Cells.

Meltrin beta/ADAM19 介导高尔基体中神经调节蛋白 beta1 的胞外域脱落：活细胞中胞外域脱落动态的荧光相关光谱观察。