ミニサテライト(MN)結合タンパク質の機能とMN変異との関連性の解析

小卫星（MN）结合蛋白功能与MN突变的关系分析

• 批准号: 12780528
• 负责人: 福田 博政
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780528/
• 关键词: ミニサテライト; 繰り返し配列; DNAタンパク質; 変異; 反復配列; DNA結合タンパク質

MN Pc1結合タンパク質MNBPsの内、UP1(pB)、LRP130(pF)の2種のタンパク質について機能解析を行い、以下の成果が得られた。1.UP1には、CDスペクトル解析によりMNPc-1のCAGGGリピートのつくる4重鎖構造をほどく機能があること、さらにはin vitro DNA合成実験においてCAGGGリピートでのDNA合成の停止を解消する作用があることを示した。即ちUP1はMNPc-及類似の反復配列のつくるDNAの4重鎖構造を破壊することにより、これらの繰り返し配列の変異を防ぐ働きをしていることが示唆された。さらにUP1にはテロメアリピートTTAGGGのつくる4重鎖構造をほどく機能もあることがCDスペクトル解析により示された。他のグループからUP1の欠損した細胞でのテロメアの短縮が報告されているので、UP1はこのテロメアリピートの4重鎖構造を1本鎖構造への変換する機能を通じてテロメアの維持に関与してる可能性が考えられる。2.LRP130は免疫染色の結果、細胞質の特に核膜周囲に存在するが、核内や核小体への局在も観察された。EGFPと融合したLRP130をHeLa細胞に導入すると、そのN-末端領域において、核膜上への強い蓄積が観察され、さらに核の形態異常が高頻度で誘発されることから、LRP130は核の構造体との相互作用を通してなんらかの機能を発現している可能性が考えられる。LRP130は、0.5%Triton X-100で溶出される画分に多く存在して、mRNAと結合していることを確認した。またLRP130はクロマチン画分にも相当量存在することがわかった。これらの結果から、LRP130は核内においてDNA及RNAと相互作用することにより機能していると推測される。

MNPc1 combines two kinds of qualitative MNBPs, UP1 (pB) and LRP130 (pF), and the following results are obtained. 1. UP1 has the function of blocking DNA synthesis in vitro by CAGGG in vitro DNA synthesis, and the function of blocking DNA synthesis in vitro by CAGGG in vitro DNA synthesis. That is, the 4-fold locking structure of MNPc-1 and similar repeated arrangements is broken, and the difference between them is prevented. UP1 is the first time that TTAGGG has been used in the construction of multi-lock. The possibility of maintaining the loss of the cell by shortening the report of the loss of the cell by the loss of the cell is examined. 2. LRP130 immunostaining results, cytoplasmic and nuclear membrane cycle, nuclear and nucleosomal cycle. EGFP fusion and LRP130 are introduced into HeLa cells, the N-terminal domain of LRP130 is detected, strong accumulation in nuclear membrane is observed, nuclear morphological abnormalities are induced frequently, and the possibility of LRP130 interacting with nuclear structures and functions is examined. LRP130 and 0.5% Triton X-100 were dissolved and identified. LRP130 has a considerable presence. LRP130 is expected to function as a nuclear DNA and RNA interaction site.

项目成果

Fukuda, H. et al.: "Detection and isolation of minisatellite Pc-1 binding proteins"Biochimica et Biophysica Acta. 1528. 152-158 (2001)

Fukuda, H. 等人：“小卫星 Pc-1 结合蛋白的检测和分离”Biochimica et Biophysicala Acta。