非放射性試薬によるin vivoナトリウム依存性グルコース輸送体活性測定法の開発

使用非放射性试剂开发体内钠依赖性葡萄糖转运蛋白活性测量方法

• 批准号: 15H00588
• 负责人: 齊藤 久美子
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: National Institute for Physiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H00588/
• 关键词: ナトリウム依存性グルコース輸送体(SGLT); 非放射性試薬; α-methyl glucoside(AMG)

肥満・糖尿病の発症過程を調べるために各臓器の糖・脂質代謝変化を測定することは、肥満・糖尿病の発症メカニズム、治療法、治療薬の開発に重要である。現在、各臓器及び細胞における糖・脂質代謝速度を測定するためには、放射性化合物(RI)が用いられるが、その利用には、多くの制約がある。そこで、この問題に対処するため、非放射性試薬を用いた糖・脂質代謝測定法の開発に取組んでいる。現在は、非RI標識α-methyl glucoside (AMG)を用いたナトリウム依存性グルコース輸送体(SGLT)活性の測定法の開発を行なっている。グルコースアナログであるAMGは、SGLTを介して細胞内に取込まれ、代謝されずに細胞内に蓄積する。細胞内に蓄積したAMG量を測定することでSGLT活性を測定する。AMGの定量については、AMGを酵素反応によりグルコースに変換後、先に開発した酵素法(Anal. Biochem. 412. p9-17.2011)を改良した測定法を昨年確立した。本年は、本法を用いて培養細胞ならびにマウス組織に取り込まれたAMG量の測定を試みた。In vivoにおけるAMG取込み測定法開発の過程で、組織中のグルコース、グルコース6リン酸(G6P)がAMG測定に大きく影響することが明らかとなった。試料測定には、それらを取り除く必要があり、内因性グルコース、G6Pを簡便に取り除く方法について検討した。条件検討には、HEK (ヒト腎臓由来)細胞にSGLT遺伝子を導入した強制過剰発現細胞を用いた。SGLT発現細胞によるAMG取込み実験を行い、内因性のグルコース、G6Pの除去を試みた。細胞溶液をある方法で処理したところグルコースとG6Pは、分解されるが、AMGは分解されないことを確認し、内因性のグルコース、G6Pの影響を取り除くことに成功した。現在、マウス組織による測定条件を調べている。

The regulation of diabetes development process, determination of carbohydrate and lipid metabolism in various organs, and the importance of diabetes development process, treatment, and development of treatment. The metabolism rate of sugar and lipid in various organs and cells was measured. The use of radioactive compounds (RI) was controlled by many factors. The development of sugar and lipid metabolism assays for non-radioactive assays The development of an assay for the activity of non-RI-labeled α-methyl glucoside (AMG) is now underway. AMG and SGLT are involved in intracellular metabolism and accumulation. Measurement of AMG accumulation in cells AMG quantitative analysis, AMG enzyme reverse analysis Biochem. 412. p9-17.2011). This year, the method was used to determine the amount of AMG in cultured cells In vivo, AMG assay development process, tissue and protein (G6P) in the AMG assay greatly affected the results. Sample determination is necessary, intrinsic, and simple. Conditions for the introduction of SGLT genes into HEK (kidney origin) cells and the use of stress cells SGLT discovery cell AMG detection center, intrinsic detection center, G6P detection center The method of cell solution treatment was successful in removing G6P from the solution. Now, it's time to adjust the measurement conditions.