非放射性試薬によるナトリウム依存性グルコース輸送体（ＳＧＬＴ）の活性測定法の開発

开发使用非放射性试剂测量钠依赖性葡萄糖转运蛋白（SGLT）活性的方法

• 批准号: 26930012
• 负责人: 齊藤 久美子
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: National Institute for Physiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26930012/
• 关键词: 糖代謝; SGLT

肥満・糖尿病の発症過程において、各臓器の糖・脂質代謝変化を測定することは、肥満・糖尿病の発症メカニズム、治療法の開発に重要である。現在、各臓器及び細胞における糖・脂質代謝速度測定は、放射性化合物(RI)が用いられ、その利用には多くの制約がある。そこで申請者は、非放射性試薬を用いた糖・脂質代謝測定法の開発に取組んでいる。本年は、ナトリウムイオン依存性能動輸送によるグルコース輸送体、SGLTによる糖取込み測定法の開発を行なった。測定には、グルコースアナログであるα-methy glucoside (AMG) を用いた。AMGは、SGLTを介して(GLUTには反応しない)選択的に細胞内に取込まれる。その後、代謝されず細胞内に蓄積することから、細胞内に蓄積したAMG量を測定することで、SGLT活性を測定した。AMGの定量は、AMGに代謝酵素を作用させてグルコースに変換し、先に開発した2DG酵素法を改良して定量した(Anal. Biochem. 412. p9-17. 2011)。本研究では、AMGをグルコースに変換する酵素の反応条件、生成されたグルコースを2DG酵素法で測定するための測定条件(酵素濃度、反応時間等)を検討した。また腎臓由来培養細胞(LLC-PK1細胞)を使って、AMG取り込み実験を行った結果、本測定法によってAMGの検量線を作成するとともに、LLC-PK1細胞へのAMGの取り込みを定量化することができた。

The development of diabetes mellitus, the determination of glucose and lipid metabolism in various organs, and the development of diabetes mellitus are important. Now, all organs and cells in the sugar and lipid metabolism rate measurement, radioactive compounds (RI) use, use, and many restrictions. The applicant is interested in the development of sugar and lipid metabolism assays for non-radioactive assays. This year, the development of a new method for the determination of glucose and glucose is under way. Determination of α-methy glucoside (AMG) AMG and SGLT are selected for intracellular selection. The amount of AMG accumulated in the cells was determined after metabolism and SGLT activity. AMG quantitative analysis, AMG metabolic enzyme action, first developed 2DG enzyme method improved quantitative analysis Biochem. 412. p9-17. 2011)。In this study, the enzyme reaction conditions, production conditions and measurement conditions (enzyme concentration, reaction time, etc.) of AMG were discussed. The assay was performed on cultured kidney derived cells (LLC-PK1 cells) and AMG assay was performed to quantify AMG assay lines.