非放射性試薬によるナトリウム依存性グルコース輸送体（ＳＧＬＴ）の活性測定法の開発

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肥満・糖尿病の発症過程において、各臓器の糖・脂質代謝変化を測定することは、肥満・糖尿病の発症メカニズム、治療法の開発に重要である。現在、各臓器及び細胞における糖・脂質代謝速度測定は、放射性化合物(RI)が用いられ、その利用には多くの制約がある。そこで申請者は、非放射性試薬を用いた糖・脂質代謝測定法の開発に取組んでいる。本年は、ナトリウムイオン依存性能動輸送によるグルコース輸送体、SGLTによる糖取込み測定法の開発を行なった。測定には、グルコースアナログであるα-methy glucoside (AMG) を用いた。AMGは、SGLTを介して(GLUTには反応しない)選択的に細胞内に取込まれる。その後、代謝されず細胞内に蓄積することから、細胞内に蓄積したAMG量を測定することで、SGLT活性を測定した。AMGの定量は、AMGに代謝酵素を作用させてグルコースに変換し、先に開発した2DG酵素法を改良して定量した(Anal. Biochem. 412. p9-17. 2011)。本研究では、AMGをグルコースに変換する酵素の反応条件、生成されたグルコースを2DG酵素法で測定するための測定条件(酵素濃度、反応時間等)を検討した。また腎臓由来培養細胞(LLC-PK1細胞)を使って、AMG取り込み実験を行った結果、本測定法によってAMGの検量線を作成するとともに、LLC-PK1細胞へのAMGの取り込みを定量化することができた。