非放射性試薬による消化管SGLT活性測定法の開発と肥満による影響の解析

开发使用非放射性试剂测量胃肠道 SGLT 活性的方法并分析肥胖的影响

• 批准号: 17H00603
• 负责人: 齊藤 久美子
• 金额: $ 0.36万
• 依托单位: National Institute for Physiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00603/
• 关键词: ナトリウム依存性グルコース輸送体(SGLT); α-メチルグルコシド; 糖代謝

肥満・糖尿病の発症過程を調べるために各臓器の糖・脂質代謝変化を測定することは、肥満・糖尿病の発症メカニズム、治療法、治療薬の開発に重要である。現在、各臓器及び細胞における糖・脂質代謝速度の測定には、放射性化合物(RI)が用いられている。その利用には、多くの制約がある。そこで、非RI試薬を用いた糖・脂質代謝測定法の開発に取組んでいる。近年、ナトリウムイオン依存性グルコース輸送体(SGLT)活性を阻害すると尿糖として糖が排出され、2型糖尿病を改善することが明らかとなり、腎臓に主に発現するSGLT2の役割が注目されている。一方、消化管におけるグルコース取り込みは、主にSGLT1を介して行われる。消化管におけるSGLT1のグルコース取り込みを非RIで測定することは、多数のSGLT1阻害剤候補化合物のスクリーニングを可能にし、肥満及び糖尿病の治療薬開発につながる。そこで非RI試薬によるマウス消化管SGLTを介したin vivoにおけるグルコース取り込み測定法の確立をめざした。SGLTのグルコース取込み測定は、α-methylglucoside(AMG)を用い、非RI標識AMGを酵素によりグルコースに変換し、生成したグルコースを定量することで、AMGを定量した(特願2017-093141号)。本年は、本法を用いてマウス消化管におけるAMGの取込みを測定した。AMGを経口よりマウスに投与し、一定時間後に消化管を上部(空腸)、下部(空腸、回腸)に分けて採取し、小腸上皮細胞に取り込まれたAMG量を測定した。採取した組織を十分に洗うことで細胞外グルコース、二糖類を除いた後、腸管上皮細胞を回収した。酵素測定は、測定溶液の適度な希釈とアルカリ熱処理により、内因性グルコースとグルコース6リン酸を除去し、細胞内に取り込まれたAMG量を測定した。AMGの投与量による取り込み量変化、AMG投与後の時間経過による取り込み量変化について検討した。AMGの投与濃度を増加することにより、取り込み量が増加した。投与後20分の取り込みが一番高く、以後消化管におけるAMGの蓄積量が低下した。肥満・糖尿病マウスにおいて取込みの低下が見られた。血液中のAMGを測定したところ、AMGが血液中に移行することを確認した。今後は、肥満マウスにおける実験数を増やし、消化管粘膜、血液中のAMG濃度変化を調べるとともに、SGLT阻害剤の投与効果を調べたい。

The regulation of diabetes development process, determination of carbohydrate and lipid metabolism in various organs, and the importance of diabetes development process, treatment, and development of treatment. Now, various organs and cells are used to measure the metabolic rate of sugar and lipid, and radioactive compounds (RI) are used to measure the metabolic rate of sugar and lipid. The use of. The development of glucose and lipid metabolism assays for non-RI and non-RI assays In recent years, it has become clear that SGLT2, which is mainly found in the kidney, can inhibit the activity of the nature-dependent glomerular transporter (SGLT), eliminate urine glucose and glucose, and improve type 2 diabetes. One side, digestive tract, digestive SGLT1 inhibitor candidate compounds may be used in the development of drugs for the treatment of diabetes mellitus. The method for determining the content of the digestive tract in vivo was established. SGLT has been identified by enzyme detection, α-methylglucoside (AMG) detection, and non-RI identification of AMG detection (Japanese Patent Application No. 2017 - 093141). This year, the method is used to determine the digestive tract. AMG was injected into the upper part (jejunum) and lower part (jejunum and ileum) of the digestive tract for a certain time, and the amount of AMG in the intestinal epithelial cells was measured. Take the tissue and remove the sugar from the cells. Enzymes are determined by heat treatment, intracellular acid removal, and intracellular AMG determination. AMG's input quantity is changed according to the change of time, and AMG's input quantity is changed according to the change of time. AMG dosage and concentration increased. After 20 minutes of injection, AMG accumulation is low. Diabetes mellitus, diabetes mellitus, diabetes mellitus AMG in the blood is determined and AMG in the blood is determined. In the future, the concentration of AMG in the digestive tract mucosa and blood will be adjusted.

项目成果

細胞内α-メチルグルコシド(AMG)の定量方法

细胞内 α-甲基葡萄糖苷 (AMG) 的定量方法

• 发表时间: 2016