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質量分析を用いたβラクタマーゼ産生腸内細菌科細菌の検出法の開発

产β-内酰胺酶肠杆菌科细菌质谱检测方法的开发

基本信息

批准号：
17H00612
负责人：
中村竜也
金额：
$ 0.35万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00612/
关键词：
質量分析カルバペネマーゼ腸内細菌科細菌

项目摘要

【研究目的】カルバペネマーゼ産生腸内細菌科細菌(CPE)が世界的に問題となっており、抗菌薬治療および感染対策において迅速な検出が重要である。現在、CPEの検出には薬剤感受性試験、PCR法、Modified Hodge Test、CarbaNP、CIM法など様々な方法が存在するが、全て感度・特異度ともに100%示す方法は存在しない。また、迅速性に乏しい方法もある。そこで、MALDI Biotyperの機能の一つであるSTAR-BL Asseyを使用したCPEの検出について検討し、CPE検出ツールの一つとしての有用性を評価した。【研究方法】PCR法により耐性機序の判明した腸内細菌科細菌で、IMP-6型、IMP-1型、OXA48型、OXA181型、KPC型、VIM型、SMB型、NDM-1型、GES型の9種類の遺伝子型CPEおよびその他ESBLおよびAmpCβラクタマーゼ産生株を用いた。方法は、Ertapenem(ETPM)の原末を0.1μg/mL(原法)および0.02μg/mL(改良法)に調整し、その1mLに1μループで菌を取り、縣濁する。35℃で2時間浸透させた後、13000rpm2分遠心し、上清1μLをターゲットプレートに塗布し、STAR-BL用マトリックスを使用し測定した。【研究成果】ETPM 0.1μg/mLでは、IMP-6型、IMP-1型、KPC型、VIM型、SMB型、NDM-1型は、ETPMの分解が確認されカルバペネマーゼ産生と同定された。OXA48型は判定が境界ライン上で判定保留となった。OXA181型およびGES型は、陰性と判定された。0.02μg/mLでは、OXA48、OXA181型およびGES型も陽性となり、CPE検出のETPMの最適濃度は0.02μg/mLと考えられた。加えて、CMY-10型セファロスポリナーゼも、陽性と判定され、これは過去にカルバベネム分解性があると報告されており、通常では検出困難な型も検出可能であった。STAR-BLを使用したカルバペネマーゼ産生菌の検出は、日本で多く検出されるIMP型やVIM型の検出に問題はないと考えられた。また、ETPMの濃度を改良することで、感度を向上することができた。カルバペネマーゼの迅速な検出は、薬剤耐性菌対策への貢献と抗菌薬適正使用に寄与できると考えられる。

[Objective] Rapid detection of enterobacteriaceae (CPE) in the world is an important problem for the development of bacterial diseases, antimicrobial therapy and infection control strategies. At present, CPE detection methods include sensitivity test, PCR method, Modified Hodge Test, CarbaNP method, CIM method, etc. All methods exist, and all methods exist. Fast, fast, fast, fast. MALDI Biotyper's functionality is evaluated for its usefulness in the use of CPE detection. [Methods] PCR method was used to identify the resistance mechanism of 9 types of Enterobacteriaceae bacteria, IMP-6, IMP-1, OXA48, OXA181, KPC, VIM, SMB, NDM-1, GES, and other ESBL and AmpC beta strains. Methods: Ertapenem(ETPM) was extracted from the original 0.1μg/mL(original method) and 0.02μg/mL(modified method). 35℃ for 2 minutes, 13000rpm for 2 minutes, supernatant for 1μL. [Results] ETPM 0.1μg/mL, IMP-6, IMP-1, KPC, VIM, SMB, NDM-1, and ETPM decomposition were confirmed. OXA48 type is reserved for determination of boundary. OXA181 type GES type, negative 0.02μg/mL, OXA48, OXA181, GES, CPE, ETPM, 0.02μg/mL Add to cart, CMY-10 type, positive, determination, past, decomposition, report, normal, difficult to detect, type, possible. STAR-BL is used to detect the presence of IP-type and VIM-type bacteria. The concentration of ETPM is improved, and the sensitivity is improved. The rapid detection of antibiotics, the contribution of resistant bacteria to antibiotics, and the proper use of antibiotics