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体細胞突然変異の遺伝子部位特異的な導入機構

基因位点特异性引入体细胞突变的机制

基本信息

批准号：
16017248
负责人：
縣保年
金额：
$ 3.78万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16017248/
关键词：
遺伝子感染症癌発現制御免疫学

项目摘要

1)E2Aによる抗体遺伝子の転写誘導とクロマチン構造変化の解析、および体細胞突然変異導入の試み遺伝子導入効率の高いBOSC23細胞にE2A転写因子を発現させると、E2Aが内在性Igκ遺伝子の可変領域に結合し、ヒストンH3、H4のアセチル化とH3-K4のメチル化の上昇を介して転写を誘導することを見出した。そこでE2AとともにAIDを発現させ、内在性Igκ遺伝子で体細胞突然変異が導入できるか解析したが、変異は導入されなかった。このことから、E2Aの単独発現では転写とヒストンアセチル化の誘導レベルが充分でないことが示唆された。2)E2Aによってリクルートされるヒストンアセチル化酵素の同定そこでE2Aによって動員されるヒストンアセチル化酵素を検索したところ、CBP/p300がE2Aと結合し、さらにE2AによってIgκ遺伝子可変領域にリクルートされることを見いだした。そこで、E2Aと共にCBP/p300を過剰発現させたところH3-K18のアセチル化が特異的に促進され、転写が増強されること、逆にsiRNAによって内在性のCBP/p300をノックダウンするとH3-K18のアセチル化が低下し、転写も低下することを見出した。以上の結果を踏まえて、CBP/p300の過剰発現により転写とヒストンアセチル化の誘導レベルを上昇させた状態でE2AとAIDを共発現させ、内在性抗体遺伝子で体細胞突然変異が誘導されないか、逆に突然変異を誘導できる細胞株でE2AやCBP/p300を低下させ、変異の導入頻度が低下しないか引き続き検討を行なっている。

1) E2A gene expression induction and structural transformation analysis, and high efficiency of gene expression in BOSC23 cells induced by somatic mutation; E2A gene expression in the variable domain of intrinsic Ig kappa gene binding; H3 and H4 gene expression induction; E2A and AID are revealed, and the intrinsic Igκ gene is suddenly introduced into somatic cells. E2A is a single entity that is capable of producing a variety of products. 2) Identification of E2A and CBP/p300 binding to E2A and identification of E2A and CBP/p300 binding to E2A and identification of E2A and CBP binding to E2A. CBP/p300 gene expression was enhanced by siRNA, and CBP/p300 gene expression was decreased by siRNA. The results showed that CBP/p300 was detected in a cell line with E2A and AID, and CBP/p300 was detected in a cell line with E2A/p300 and CBP/p300 in a cell line with E2A/AID.