病原性酵母カンジダ・アルビカンスの染色体組換えを制御するタンパク質の検索

寻找控制致病性白色念珠菌中染色体重组的蛋白质

• 批准号: 08770191
• 负责人: 岩口 伸一
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Nara Women's University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770191/
• 关键词: Candida albicans; 反復配列; 染色体再配列; ゲル・シフト法; DNA結合タンパク質

日和見感染菌である酵母C.albicansのゲノム全体に存在している反復配列RPS1は、染色体再配列の生じている部位に局在している。このような反復配列がゲノム上に存在している場合、組換えを制御するタンパク質が細胞中に存在しなければ、ランダムな組換えが生じ、ゲノムの不安定性を引き起こすと考えられる。本研究ではC.albicansの反復配列RPS1に結合する調節タンパク質をゲル・シフト法により探索した。ゲル・シフト法では、ポリアクリルアミド電気泳動において、DNA断片とタンパク質の複合体の移動度は遊離のDNA断片に比べて遅くなるという原理を利用する。RPS1配列から30〜100bpのDNA断片を調整、ラベルし、C.albicansからのタンパク質抽出液と反応させた。その結果、30bpのCOM29に対して強く結合するタンパク質と、RNAとして発現している領域のDNA断片に結合するタンパク質を検出できた。COM29配列に結合するタンパク質は、大過剰の未標識のプローブを加えた競合実験においてもシグナルが観察される事から配列特異性が非常に高く、かつ結合力がかなり大きい事が分かった。さらにサウス・ウエスタン法によりCOM29配列に結合するタンパク質の大きさを調べたところ、49、38、26.8kdの3つのポリペプチドが検出された。COM29配列はRPS1ユニット中に5個存在しているため、このタンパク質がRPS1内部、さらにはRPSクラスター全体をパッケージングすることにより、組換えの鋳型として機能させなくしている可能性が考えられる。現在、COM29配列をCNBr-sepharose 4Bに結合させたDNAアフィニティーカラムを作製し、結合タンパク質の単離を試みている。

In Japan, all the yeast C.albicans are present, and RPS1 and chromosome rearrangement are present. This kind of repeated arrangement can exist on the computer, the substance that controls the change can exist in the cell, the change of the computer can occur, and the instability of the computer can be caused. This study explored the regulation of C.albicans in combination with RPS1. The method of DNA fragmentation utilizes the principle of DNA fragmentation and mobility of DNA fragments and DNA complexes. RPS1 alignment from 30 to 100bp DNA fragments to adjust, adjust, C.albicans to extract and reverse. As a result, the 30bp COM29 fragment binds strongly to the DNA fragment in the RNA region. COM29 alignment binding is very high in quality, high in binding power, and high in specificity. In addition, the COM29 array is composed of three components: 49, 38, and 26.8 kd. COM29 is configured to be 5 in RPS1, and the RPS1 is configured to be 5 in RPS1, and the RPS1 is configured to be 5 in RPS1, and the RPS1 is configured to be 5 in RPS1. Now, COM29 alignment CNBr-sepharose 4B binding to DNA, binding to DNA.