酵母系を用いたインフルエンザウイルス転写・蛋白質合成機構の分子遺伝学的解析

利用酵母系统对流感病毒转录和蛋白质合成机制进行分子遗传学分析

• 批准号: 08770220
• 负责人: 飯塚 成志
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770220/
• 关键词: インフルエンザ; 酵母; 転写; 蛋白質合成

本研究の目的はインフルエンザウイルスの転写、翻訳系を酵母細胞内で再現することであった。本年度はGST融合蛋白質としてインフルエンザウイルスの転写関連蛋白質を酵母内で発現させ、その動態を解析した。この結果をふまえ、同ウイルスの転写・翻訳系を酵母細胞内で再現することに成功した。具体的な実験結果は以下の通りである。1)強力な酵母由来のプロモーターを利用して、3つのインフルエンザウイルス複製・転写関連蛋白質を酵母内で同時に発現させた。これらの蛋白質はGST(グルタチオン-S-トランス フェラーゼ)との融合蛋白質として発現させており、グルタチオンカラムで発現蛋白質を精製できた。発現した蛋白量は細胞あたり100分子程度とわずかであったが、本来の宿主細胞の場合と同様、3つの蛋白質がコンプレックスを形成することを示した。2)この3つの蛋白質に加え、ワクシニアウイルスVP39蛋白、インフルエンザウイルス由来RNA結合蛋白質NP、および鋳型RNAを同時に酵母細胞に導入した。鋳型RNAはルシフェラーゼ遺伝子の相補遺伝子であり、両端にインフルエンザウイルス複製転写プロモーターを持つ。このとき、ルシフェラーゼの活性の有意な上昇が検出された。これは鋳型RNAからの転写、翻訳が酵母細胞内で起こったことを示している。本実験の結果からインフルエンザウイルスの(少なくとも)転写反応は酵母内で再現できる可能性を示した。今後この効率を上げることができれば、酵母の強力な遺伝学的解析技術により、宿主因子の解析や転写複製メカニズムの解析にパワフルな研究手段となることが期待される。

The purpose of this study is to reproduce the contents of yeast cells by writing and translating them into yeast cells. This year, the GST fusion protein has been analyzed and analyzed in the yeast. The results of the test were successfully reproduced in the yeast cells using the same method as the original writing and translation system. The specific results are as follows. 1) The origin of powerful yeast is the use of yeast, and the use of 3 yeasts to copy and write related proteins into the yeast.これらのproteinはGST(グルタチオン-S-トランスフェラーゼ)とのfusion protein として発appears させており, グルタチオンカラムで発appears protein をpurified できた. The protein content of the cells is 100 molecules, and the original host is The situation of the cell is the same as that of the 3 protein proteins. 2) この3つのproteinに加え, ワクシニアウイルスVP39 protein, インフルエンザウThe イルス-derived RNA-binding protein NP and the および鋳-type RNA are introduced into yeast cells at the same time.鋳RNAはルシフェラーゼ伝子のphaseSupplement伝子であり、両The end of the story is a copy of the original story.このとき、ルシフェラーゼの Active のIntentional なrise が検出された. The これは鋳 type RNA is written by からの転, translated into でったことをshowing している in yeast cells. The result of this 実験のからインフルエンザウイルスの(小なくとも)転writes the なくとも in the yeast and reproduces the possibility of できるをshows した. From now on, we will analyze the efficiency of yeast and analyze the host factors子のANALYSISや転WRITE COPYメカニズムのANALYSISにパワフルな RESEARCH MEANS となることが EXPECT される.