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T細胞分化決定にともなうTCRβ遺伝子の転写と再構成の機構解明

TCRβ基因转录和重排与T细胞分化决定相关的机制

基本信息

批准号：
08770241
负责人：
穂積勝人
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770241/
关键词：
T細胞分化遺伝子再構成 TCR 脱メチル化 GATA3

项目摘要

我々はT細胞系列分化決定の分子機構を解明することを目的として、TCR遺伝子再構成に先行して起こる、TCR遺伝子の脱メチル化およびgerm-line型転写がT細胞初期分化の有用なマーカーになることを見出し、これを誘導する分子機構について解析してきた。本研究ではT細胞特異性の高い転写因子、GATA3に着目し、GATA3が発現しないB系細胞(A20)にGATA3cDNAを正逆両方向に導入し、その影響について検討した。その結果、正方向にGATA3を導入したトランスフェクタント(Tf)においてのみ、TCRβ遺伝子のJβ2領域での脱メチル化が誘導された。しかし、Jβ1領域での脱メチル化は認められなかったことから、導入したGATA3はβ遺伝子エンハンサーのみならず、これまでに知られていないJβ2特異的な領域にも影響される可能性が示された。そこでJβ2上流域の塩基配列を検索するとともに、一部配列が明らかにされていないJβ1上流域の塩基配列を決定したところ、Jβ2上流域にのみGATA3結合配列が見出され、そのGATA3との結合がEMSAにて確認された。しかし、GATA3結合配列を含むJβ2上流域をクローン化後、luciferase遺伝子上流に接合し、転写活性化能を、germ-line型転写が認められた未熟T細胞株(当教室にて樹立)に導入して調べたが、有意な活性は認められなかった。GATA3-TfにおいてもTCRβ遺伝子のgerm-line型転写は検出されなかったことと考え合わせると、転写反応の開始には、GATA3以外の転写因子がさらに必要なことが予想された。しかしGATA3発現によってJβ2上流域は脱メチル化反応に示されるDNAの状態変化が誘導されたものと考えられ、T細胞初期分化におけるGATA3の重要性とともに、Jβ2特異的なシスエレメントの存在が強く示唆された。

We aim to elucidate the molecular mechanisms that determine T cell lineage differentiation, TCR gene recombination, TCR gene dedifferentiation, and germ-line pattern development that are useful for T cell lineage differentiation. In this study, we investigated the effects of T cell-specific high expression factors, GATA3 gene expression, GATA3 gene expression in B-lineage cells (A20), and GATA3 cDNA introduction in the forward and reverse directions. As a result, GATA3 was introduced in the positive direction, and Tf was induced in the Jβ2 domain of TCRβ gene. The possibility of the Jβ2-specific domain influence is demonstrated by the introduction of GATA3 beta gene into the Jβ1 domain. The base alignment of the J β 2 upper basin is determined by the combination of GATA3 and EMSA. GATA3 binding alignment includes Jβ2 up-stream conjugation, luciferase up-stream conjugation, germ-line activation, and introduction of immature T cell lines (when established in the classroom). GATA3-Tf-TCR β gene's germ-line type writing factor is not required. GATA3 expression in the Jβ2 upper region indicates the state of DNA induction, the importance of GATA3 in T cell differentiation, and the presence of Jβ2-specific DNA.