T細胞分化過程におけるTCR遺伝子高次構造制御の分子機構

T细胞分化过程中TCR基因构象控制的分子机制

• 批准号: 09770224
• 负责人: 穂積 勝人
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770224/
• 关键词: T細胞レセプター; 遺伝子再構成; シスエレメント; 転写因子; GATA3; T細胞; 分化; TCR遺伝子; 転写制御

T細胞受容体(TCR)の4鎖は、各分化ステージ特異的に遺伝子が再構成して発現する。しかし、そのような遺伝子DNAの高次構造を制御する機構は不明な点が多い、この課題解明の一端として、本研究では1)TCR-α鎖遺伝子変化を制御するシスエレメントの同定、及び2)TCR-β鎖遺伝子再構成とT細胞系列分化に深く関わる転写因子GATA3の役割を検索した。その結果得た各項目の成果を以下に記載する。1)昨年、TCR-α鎖遺伝子の分化ステージ特異的な新しい制御シスエレメントをJα49上流域(170bp)に見出した。本年度は、その領域を129マウスゲノムライブラリーから単離して、それをもとにtargeting-vectorを作製し、homologousrecombination法により当該領域欠損マウスを樹立した。その解析の結果、TCR-α鎖の内、Jα49-45セグメントまでの遺伝子再構成とgerm line(GL)転写は検出されなかった。従って、TCR-α鎖遺伝子再構成にはエンハンサー以外に分化ステージ特異的なシスエレメントが近傍のセグメントに作用することが明らかとなった。さらに、先行するGL転写は同部位のDNA再構成に必須であることを、直接証明した。2)TおよびB両細胞すべての分化ステージに発現を惹起するベクターを結合した遺伝子を導入したGATA3ミュータントマウスを作製した。それらから繁殖したマウスの胎仔肝、骨髄、脾臓からプレB細胞とB細胞を得て解析したが、予想に反してB細胞系のどの分化ステージにもTCR-β鎖遺伝子の再構成は認められなかった。又、B細胞の減少も著明でなかった。B細胞分化への抑制が著しくない1原因として、導入GATA3遺伝子の弱発現が考えられるので、現在異なるプロモーター結合のGATA3導入マウスを作製中である。

T cell receptor (TCR) 4 locks, each differentiation of the specific gene recombination and development The mechanism for the regulation of higher-order structure of TCR-α gene expression is unclear. This study is aimed at clarifying one end of the problem. The study includes: 1) the regulation of TCR-α gene expression; and 2) the regulation of TCR-β gene expression; and 3) the regulation of gene expression factor GATA3. The results of each project are described below. 1)Last year, a new type of TCR-α gene differentiation was found in the upper Jα49 region (170bp). This year, the field is 129, and the target-vector control method is established when the field is deficient. The results of analysis, TCR-α lock, Jα49-45, gene reconstruction, germ line(GL), and gene recombination were analyzed. TCR-α lock gene recombination is not only the function of the close chain, but also the function of the close chain. In addition, it is necessary to directly prove the DNA reconstruction of the same site. 2) The differentiation of T and B cells is initiated by the introduction of GATA. The development of TCR-β gene in fetal liver, bone marrow and spleen cells is expected to result in the differentiation of B cell lines and the reconstitution of TCR-β gene. Also, B cells are reduced. The inhibition of B cell differentiation is due to the presence of GATA3 gene and the presence of GATA3 gene.

项目成果

Takehito sato: "CD45 can act as a negative fegulator for the transition from early to late CD4^+CD8^<+8> thymocytes." Int.Immunol.11. 89-97 (1999)

Takehito sato：“CD45 可以充当从早期 CD4^ CD8^<8> 胸腺细胞向晚期 CD4^ CD8^<8> 胸腺细胞转变的负调控因子。”

Yoshiekametani: "EX vivo evidence for asymmetric tyrosine phosphorylation of ZAP-70 on double-positive thymocytes in the positive seleciton process" Int.Immunol.10・8. 1203-1210 (1998)

Yoshiekametani：“在阳性选择过程中双阳性胸腺细胞上 ZAP-70 的不对称酪氨酸磷酸化的体外证据”Int.Immunol.10・8（1998）。

Katsuto Hozumi: "Evidence of stage-specific element for germ-line transcription of the T cell receptor α gene located upstream of Jα49 locus" Eur.J.Immunol.28. 1368-1378 (1998)

Katsuto Hozumi：“位于 Jα49 位点上游的 T 细胞受体 α 基因生殖系转录的阶段特异性元件的证据”Eur.J.Immunol.28 (1998)。

Katsuto Hozumi: "Stage specific element for germ-line transcription of the TCR receptor α gene" 10th International Congress of Immunology. 173-176 (1998)

Katsuto Hozumi：“TCR 受体 α 基因种系转录的阶段特异性元件”第 10 届国际免疫学大会 173-176（1998 年）。

Katsuto Hozumi: "Establishment of efficient reaggregation culture system for gene transfection into immature T cells by retroviral vectors." J.Immunol.Methods.(in press). (1998)

Katsuto Hozumi：“建立有效的重新聚集培养系统，通过逆转录病毒载体将基因转染到未成熟的 T 细胞中。”