糖脂質ガングリオシドGM2に対するキメラ抗体の抗腫瘍作用の検討

糖脂神经节苷脂GM2嵌合抗体的抗肿瘤作用研究

• 批准号: 08770447
• 负责人: 西尾 和人
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770447/
• 关键词: ガングリオシドGM2; キメラ抗体; ナチュラル・キラー; 肺がん; アドリアマイシン耐性; 抗腫瘍効果; in vivo; N-アセチルガラクトサミニルトランススェラーゼ

1.N-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼcDNAをSBC-3細胞株より単離後、発現ベクターpBMG-Neoを用いLLC細胞株およびB16細胞株に導入した。ガングリオシドGM2の高発現をフローサイトメトリーにて確認した。2.GM2陽性であるSBC-3および強陽性のアドリアマイシン耐性ヒト肺がん細胞株SBC-3/ADMを標的とし、ヌードマウス皮下移植モデルを用い抗GM2キメラ抗体のin vivo抗腫瘍効果を検討した。2x10^7個のSBC-3およびSBC-3/ADM細胞を移植し、7日後より100μg/マウス・日のキメラ抗体を静脈内投与行った。毒性は観察されなかった。治療終了時には4/5マウスに腫瘍の縮小を認め、最終的に2/5マウスで完全消失を認めた。SBC-3/ADM腫瘍径は約5mmで全て(4/4)のマウスにおいて完全消失を認めた。SBC-3/ADM腫瘍においては治療群に比較して遅れるもののコントロール群の腫瘍も経時的に腫瘍の縮小を認め評価不能であったが、その要因がナチュラル・キラー細胞のようなアシアロGM1陽性細胞である可能性が示唆された。そこで、アシアロGM1陽性細胞のSBC-3/ADMに対する細胞障害性を抗アシアロGM1抗体を用いてブロックしたSBC-3およびSBC-3/ADM細胞を移植系でキメラ抗体の効果を評価した。治療開始時におけるSBC-3腫瘍径は約9mm、SBC-3/ADM腫瘍径は約10mmであったが、治療終了時には各々の群で4/5、5/5マウスにおいて腫瘍径が1/2以下になる効果を認めた。最終的には3/5、5/5マウスにおいて完全消失を認めた。以上からガングリオシドGM2の高発現細胞に対してin vivoにおいてもKM966は強い抗腫瘍効果を有することが示された。毒性は観察されず、抗ガングリオシドGM2キメラ抗体のin vivo内の有用性の高さが示唆された。

1。从SBC-3细胞系中分离出N-乙酰乳糖酰氨基转移酶cDNA后，使用表达载体PBMG-NEO将其引入LLC细胞系和B16细胞系中。通过流式细胞术证实了神经节苷脂GM2的高表达。 2。我们使用针对GM2阳性SBC-3的裸小鼠皮下植入物模型和强烈的抗adricmycin抗Adramycin的人肺癌细胞系SBC-3/ADM研究了抗GM2嵌合抗体的体内抗肿瘤作用。植入2x10^7 SBC-3和SBC-3/ADM细胞，并在7天后静脉注射100μg/鼠标天嵌合抗体。未观察到毒性。治疗结束时，在4/5只小鼠中肿瘤收缩，最后完全消失在2/5小鼠中。 SBC-3/ADM的肿瘤直径约为5 mm，在所有（4/4）小鼠中均观察到总损失。尽管与治疗组相比，SBC-3/ADM肿瘤延迟了，但对照组的肿瘤也随时间播放了肿瘤的收缩，无法评估，这表明该因子可能是AsialogM1阳性细胞，例如天然杀伤细胞。因此，使用SBC-3和SBC-3/ADM细胞在移植系统中评估了嵌合抗体的作用，这些细胞被抗AsiaLogM1抗体阻断，以抗AsialogM1阳性细胞中针对SBC-3/ADM的细胞毒性。在治疗开始时，SBC-3肿瘤直径约为9 mm，SBC-3/ADM肿瘤直径约为10 mm，但是在治疗结束时，在4/5和5/5小鼠中，每组肿瘤直径不超过1/2。最后，在3/5和5/5小鼠中观察到完全消失。从上面的角度来看，即使在体内对表达神经节苷脂GM2的细胞也具有强大的抗肿瘤作用。未观察到毒性，这表明抗绞中GM2嵌合抗体的体内有用性很高。