DNA fiber FISH法による造血器腫瘍における融合遺伝子の検出

DNA纤维FISH法检测造血肿瘤融合基因

• 批准号: 08770854
• 负责人: 嘉数 直樹
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770854/
• 关键词: DNA fiber FISH法; 造血器腫瘍; 融合遺伝子

multicolor DNA fiber FISH法を用いて、病型特異的な染色体相互転座が認められる造血器腫瘍における融合遺伝子のDNA fiber上での検出を行った。最初はPh染色体を有するCML細胞株BV173でBCR/ABL遺伝子融合を検出した。方法はM-bcr領域およびc-abl領域にそれぞれ位置する40kbのBCR、ABLコスミッドクローンの一方をbiotin標識、他方をdigoxigenin標識し、同時にプローブとして腫瘍細胞より作製したDNA fiber標本上でmulticolor FISH法を行った。BCR、ABLは、一定の長さの緑(FITC)と赤(ロ-ダミン)の2色の線状シグナルとして識別して検出でき、さらにこの両シグナルが同じ直線上で一定の間隔をおいて並列しているのが観察できた。この2クローン間の距離は薬160kbと見積もられた。これは、既に報告されているBV173におけるABL遺伝子の切断点からプローブに用いたABLコスミッドクローンの位置までの距離にほぼ合致した。引き続いてCMLの2症例についても同様の解析を行いBCR/ABL遺伝子融合を確認すると同時に両クローン間の距離よりABL遺伝子内の切断点の位置が推定できた。融合遺伝子の検出は間期核FISH法でも可能であるが、DNA fiber FISH法によればこれまで間期核では検出困難であった10kb程度の短いプローブでも線状のシグナルとして検出でき、プローブの選択の幅が大幅に広がるという利点がある。またCMLにおけるABL遺伝子の切断点のように広い領域にまたがる切断点の位置に関する情報も簡便・迅速に得ることが可能であることが示された。したがって、今後DNA fiber FISH法によりさまざまな腫瘍細胞における再構成、増幅などが直接可視化して検出でき、より詳細な構造異常の解析が可能となることが期待される。我々は、現在さらにt (15 ; 17)やt(8 ; 21)を有する急性骨髄性白血病についてもそれぞれPML/RAR α、AML1/MTG8遺伝子融合の検出を試みている。

multicolor DNA fiber FISH was used to identify the chromosomal interlocales specific to the disease type and to detect the DNA fiber interlocales specific to the disease type. CML cell line BV173 initially had Ph chromosomes and BCR/ABL gene fusion was detected. Methods: 40kb BCR, ABL, and DNA fiber FISH were used to identify one side of BCR and the other side of BCR and ABL. BCR, ABL, a certain length of green (FITC) and red (ro-damien) two-color linear rings are recognized and detected, but now these rings are on the same straight line with a certain interval and juxtaposed together for easy observation. The distance between the two sites is 160kb. This is reported in BV173. The distance between the cut-off point of the ABL and the position of the ABL is the same. In the case of CML, the distance between the two genes and the position of the cut-off point in the ABL gene were estimated. Interphase FISH for fusion gene detection is possible, but DNA fiber FISH is difficult to detect interphase DNA. The information on the location of the cutoff point of the ABL transmitter is simple and rapid. In the future, DNA fiber FISH will be used to reconstruct tumor cells, increase amplitude, and directly visualize and detect structural abnormalities. We now have t (15 ; 17) and t(8 ; 21) in acute osteoblastic leukemia, which includes PML/RAR α and AML1/MTG8 gene fusion.

项目成果

稲澤譲治、嘉数直樹、阿部達生: "ヒト染色体(編集・清水信義、中込弥男)" 共立出版株式会社, 9 (1996)

稻泽让二、加一直树、阿部辰雄：《人类染色体（清水伸良、中込耀编）》共立出版公司，9（1996）

Inazawa J. Sasaki H, Naguro K, Kakazu N, et al.: "Precise localozation of the human gene encoding cell adhesion kinase β (CAK β/PYK2) to chromosome 8 at P21.1 by fluorescencein situ hybridization" Hum Genet. 98. 508-510 (1996)

Inazawa J. Sasaki H、Naguro K、Kakazu N 等人：“通过荧光原位杂交将编码细胞粘附激酶 β (CAK β/PYK2) 的人类基因精确定位到 8 号染色体的 P21.1”Hum Genet 98。 .508-510 (1996)

嘉数直樹: "臨床FISHプロトコール(監修・阿部達生、編集・稲澤譲治)" 秀潤社, 6 (1997)

Naoki Kakazu：“临床 FISH 方案（由 Tatsuo Abe 监督，Joji Inazawa 编辑）” Shujunsha，6 (1997)