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生体部分肝移植後のEBウイルス感染症の早期診断法の確立に関する研究

建立活体部分肝移植术后EB病毒感染早期诊断方法的研究

基本信息

批准号：
08770926
负责人：
中澤勇一
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770926/
关键词：
生体部分肝移植 Epstein-Barrウイルス In-situ hybridization

项目摘要

今年度はEBER1をプローブとするin situ hybridization(以下ISHと略)の系とEpstein-Barr virus(以下EBVと略)のDNA定量目的のPCR測定系を設立した。いずれも、患者末梢血液をサンプルとし測定するものである。移植患者の移植前、移植後第一日、同3日、同7日、同14日、同30日、同60日に検体をサンプリングした。また、外来患者においても、EBV感染が疑われた場合は適宜サンプリングした。1、ISHEBVのRNAプローブを購入し、さらにEBV感染細胞であるRaji cellを購入し陽性コントロールとした。染色に関してはin situ hybridization検出キットを購入使用した。陽性コントロールに対しては良好にEBV感染リンパ球の検出が可能であった。また臨床からえられた検体において陽性細胞は、全ての症例において検出されなかった。これについては、実際にEBV感染細胞が存在しなかったのか、或いは技術的問題にて検出できなかったのか、この2点が考えられたがISHに関しては、ある程度の染色の技術の習熟が必要と考えられ、今後検査施行件数をかさねたうえで検討、対処して行きと考える。今回は、EBER1プローブにてLatent infectionのリンパ球の検出のみ施行し、BHLF1プローブによるLytic infectionのリンパ球の検出は施行しなかった。2、PCR上記の時期に移植患者の血液をサンプリングしDNA抽出液キットを用いて全血中のDNAを抽出した。EBVのtypeA,typeBそれぞれのEBNA1領域のプライマーを設定し、まず、それぞれの検体中のEBVがtypeAかあるいは、typeBかを通常のPCRの方法を用いて鑑別、同定した。また、別にtypeA,typeBそれぞれのEBVを定量のPCRに用いるcompetitorとするために、段階的に希釈したコントロールを作成した。PCRによるEBVのDNA定量はsemi-nested competitivePCRにて施行した。PCRによる、typeA,Bの鑑別は(EBV-PCR定性)は、全例とも可能であった。しかしながら定量に関しては、検体サンプリングの初期量に問題があると考えられ今後の検討、追及が必要と考えられた。

This year's EBER1 testing system (in situ hybridization) is the Epstein-Barr virus (EBV) DNA quantitative purpose PCR measurement system setting. The blood of the patient's peripheral blood was detected and measured. The transplant patients were killed before transplantation, on the first day, 3 days, 7 days, 14 days, 30 days and 60 days after transplantation. It is appropriate to treat patients with suspected EBV infection, patients from other countries, and patients from other countries. 1. ISHEBV, EBV, RNA, DNA, RNA, RNA Dye the in situ hybridization to get out of the box and enter into use. There is a possibility that the EBV infection is good and that the ball may not be infected. The bed