ヒト唾液腺癌細胞におけるEpstein-Barrウイルス持続感染

人类唾液腺癌细胞中持续的 Epstein-Barr 病毒感染

• 批准号: 09877390
• 负责人: 佐藤 光信
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877390/
• 关键词: ヒト唾液腺癌細胞HSG; EBV; C3d; EBVレセプター; EBVレセプター抗原(CR-2); EBNA

1.ヒト唾液腺癌細胞(HSG)よりtotalRNAを抽出し、Molonyマウス白血病ウイルスの逆転写酵素とランダム・プライマーを用いてcDNAを調製し、これからC3d/EBVレセプターcDNAを増幅した。すなわち、cDNA-polymerase chain reaction(PCR)により、C3d/EBVレセプターに特異的なcDNAを、プライマーとして5'-CAATGGTAGTCGCGTGATTAGGTG-3'(C3d/EBVレセプター遺伝子配列No.2535-2558)と5'-TTCCAAGCAATGAGGCACACACCA-3'(C3d/EBVレセプター遺伝子配列No.3208-3185)を用いて増幅し、更にSouthern blot analysisにより、C3d/EBVレセプターアンチセンスオリゴヌクレオチド5'-GCACACCTGGCACCCATGTGTTATCAGTAT-3'に^<32>P-標識したものをプローブとして用いてC3d/EBVレセプターcDNAを同定した。2.C3d/EBVレセプター抗原(CR-2)に対するマウス単クローン抗体を用いて、HSG細胞におけるCR-2の発現を蛍光抗体法及びimmunoblottingにより検索した結果、細胞質にCR-2の発現を検出した。一方、HSG細胞をdibutyryl cAMPで処理すると、CR-2は細胞膜にtranslocationすることを明らかにした。3.EBV産生B95-8細胞をTPAで処理して調製したEBVを、dibutyrylcAMPで処理したHSG細胞に感染させた。この感染細胞において、EBNAとVCAとの発現を蛍光抗体法により検出した。この場合、EBVのカプシド蛋白質gp220(BamH1L領域)とEBNA1(BamH1K領域)のEBVゲノムの存在をPCRにより検出した。

1. ヒ ト salivary gland cells (HSG) よ り totalRNA を spare し, Molony マ ウ ス leukemia ウ イ ル ス の inverse planning write enzyme と ラ ン ダ ム · プ ラ イ マ ー を with い て cDNA を modulation し, こ れ か ら C3d/EBV レ セ プ タ ー cDNA を rights of し た. Youdaoplaceholder0, cDNA-polymerase chain Reaction (PCR) に よ り, C3d/EBV レ セ プ タ ー に specific な cDNA を, プ ラ イ マ ー と し て 5 '- CAATGGTAGTCGCGTGATTAGGTG - 3' (C3d/EBV レ セ プ タ ー heritage 伝 with sequence No. 2535-2558) と 5 '- TTCCAAG Caatgaggcacacaca-3 '(C3d/EBVレセプタ レセプタ 伝 伝 subseries 伝 No.3208-3185)を use レセプタ て to increase レセプタ, more にSouthern blot Analysis に よ り, C3d/EBV レ セ プ タ ー ア ン チ セ ン ス オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド 5 '- GCACACCTGGCACCCATGTGTTATCAGTAT - 3' に ^ < > 32 P - identify し た も の を プ ロ ー ブ と し て in い て C3d/EBV レ セ プ タ ー cDNA を with し Youdaoplaceholder0. 2. C3d/EBV レ セ プ タ ー antigen (CR - 2) に す seaborne る マ ウ ス 単 ク ロ ー を ン antibody with い て, HSG cells に お け る CR - 2 の 発 now を 蛍 optical method of antibody and び immunoblotting に よ り 検 cable し た results, cytoplasm に CR - 2 の 発 now を 検 out し た. Side, HSG cells を dibutyryl cAMP で 処 Richard す る と, CR - 2 は に cell membrane translocation す る こ と を Ming ら か に し た. 3. EBV produce B95-8 cells を TPA で 処 Richard し て modulation し た EBV を, dibutyrylcAMP で 処 Richard し た HSG cells に infection さ せ た. The <s:1> infected cells にお にお て て, EBNAとVCAと, を蛍 photoantibody method によ 検 検 produce た. こ の occasions, EBV の カ プ シ gp220 ド protein (BamH1L field) と EBNA1 (BamH1K field) の EBV ゲ ノ ム の is を PCR に よ り 検 out し た.

项目成果

Mitsunobu Sato: "Induction of cyclin-dependent kinase inhibitor,p21WAF1 by treatment with 3,4-dihydro-6-[4-(3,4)-dimethoxybenzoyl)-1-piperaginy 2(1H)-quinolinone(vesnarinone)in a human salivary cancer cell line with mufant" Cancer Letters. 112(4). 181-189

Mitsunobu Sato：“通过 3,4-二氢-6-[4-(3,4)-二甲氧基苯甲酰基)-1-哌嗪基 2(1H)-喹啉酮（vesnarinone）处理来诱导细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 p21WAF1

Masayuki Azuma: "Enhancement of bFGF export associated with malignant progression of human salivary gland cell clones" Int.f.Cancer. 71(2). 891-896 (1997)

Masayuki Azuma：“bFGF 输出的增强与人类唾液腺细胞克隆的恶性进展相关”Int.f.Cancer。

Mitsunobu Sato: "Epstein-Barr virus(EBV)infection of neoplastic human salivary intercalated duct cell line HSG expressing C3d/EBV receptor" Proceedings of 88th Annual Meeting of American Association for Cancer Research. 38. 159- (1997)

Mitsunobu Sato：“表达 C3d/EBV 受体的肿瘤性人唾液闰管细胞系 HSG 的 Epstein-Barr 病毒 (EBV) 感染”美国癌症研究协会第 88 届年会论文集。

Mitsunobu Sato: "Emergence of osteoblast-like cells in a neoplastic human salivary cancer cell line after treatment with 22-oxa-1α,25-dihydroxyvitamin D_3" Cancer Letters. 115(4). 149-160 (1997)

Mitsunobu Sato：“用 22-oxa-1α,25-二羟基维生素 D_3 治疗后，肿瘤性人唾液癌细胞系中成骨细胞样细胞的出现”，Cancer Letters 115(4) 149-160。