Rat局所脳虚血モデルにおける低脳温及び復温時の白血球接着因子の発現に関する研究

大鼠局灶性脑缺血模型低温及复温过程中白细胞粘附因子表达的研究

• 批准号: 08771083
• 负责人: 福永 篤志
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771083/
• 关键词: 一過性局所脳虚血; 細胞間接着因子; ICAM-1; 多核白血球; ミエロペルオキシダーゼ; 免疫組織化学; ウエスタンブロット法; 微小循環傷害

【目的】ラット一過性局所脳虚血モデルを用い、虚血時常温群(N群)と、低体温群(H群)の両群に於ける細胞間接着因子ICAM-1の発現の経時的変化、多核白血球(PML)の組織内浸潤を比較する事により、脳虚血中低体温の保護効果の機序について考察を加えたので報告する。【実験】雄性Wistar rat(280-320g,n=24)を用い、N群(38.0±0.5℃)及び、H群(33.0±0.5℃)両群に対し、ハロ-セン麻酔下にて2時間の一過性中大脳動脈閉塞を行った。両群において、再潅流開始後より6,24,48,96時間後に(各タイムポイントに於いてn=3)リン酸緩衝液及びパラフォルムアルデヒドにて潅流固定後、脳を摘出。50μm切片を作成し、(1)ICAM-1蛋白の発現部位、程度の検出(2)組織内に浸潤したPML数の比較のため、それぞれ抗ICAM-1モノクローナル抗体、抗ミエロペルオキシダーゼ(MPO)モノクローナル抗体により免疫染色を行い、ICAM-1蛋白の発現に関しては染色陽性の血管数を、PML数の比較に関しては組織内MPO陽性細胞数をそれぞれ光学顕微鏡下でカウントした。またICAM-1蛋白の発現については、ウエスタンブロット法による半定量化を試みた。【結果】(1)免疫染色法ICAM-1蛋白の発現(=抗ICAM-1陽性血管数);H群はN群に比し各タイムポイントにおいて有意に発現の抑制を認めた。(2)多核白血球の組織内浸潤(組織内抗MPO陽性細胞数)も、H群はN群に比し有意に抑制されていた。ウエスタンブロット法によるICAM-1蛋白発現の半定量化については、現在のところ有意を認めていない。【考察】本研究により、一過性脳局所虚血モデルに於ける低体温の保護効果の一因として、低体温によりICAM-1蛋白等の細胞間接着因子の発現が抑制され、その結果組織内に浸潤し細胞傷害性に作用する多核白血球数が減少することが考えられた。実際に白血球数の減少が神経保護に寄与しているかに関して今後更に組織学的検討を行う予定である。またウエスタンブロット法に関しても、サンプリング法、至適一次/二次抗体濃度の調整等、改善を加えた上で追試予定である。

[Objective] To compare the changes of ICAM-1 expression during transient hypothermia, normothermia (group N), hypothermia (group H) and hypothermia (group H), and to investigate the mechanisms of hypothermia protection in hypothermia. Male Wistar rats (280-320g,n=24) were used in groups C, N (38.0±0.5℃) and H (33.0±0.5℃). 6, 24, 48, 96 hours after the start of the flow and re-flow (n=3 for each group), the acid buffer solution and the re-flow are fixed and extracted. 50μm section preparation: (1) Detection of ICAM-1 protein expression site and degree;(2) Comparison of PML numbers in tissues;(3) Detection of anti-ICAM-1 antibodies, anti-ICAM-1 proteins, anti-ICAM-1 proteins, anti-ICAM-1 antibodies, anti-ICAM-1 proteins, anti-ICAM-1 antibodies, anti-ICAM The number of MPO positive cells in tissues was compared with that in control group. The expression of ICAM-1 protein was determined by semi-quantitative method. [Results](1) ICAM-1 protein expression by immunostaining (= anti-ICAM-1 positive blood vessels);H group and N group were significantly inhibited by anti-ICAM-1 protein expression. (2)Infiltration of multinucleated leukocytes (number of MPO-resistant positive cells in tissue), H group and N group was intentionally inhibited. Semi-quantitative analysis of ICAM-1 protein expression by using the method [Investigation] In this study, one of the reasons for the protective effect of hypothermia caused by transient hypothermia was that the expression of intercellular adhesion factors such as ICAM-1 protein was inhibited by hypothermia. As a result, the number of multinucleated leukocytes decreased due to the intracellular infiltration and cytotoxic effects. In fact, the reduction in white blood cell count is related to the protection of the brain, and further histological discussions will be carried out in the future. For example, if the antibody concentration is adjusted to the appropriate level, the method of "improving" the antibody concentration will be followed up.