レフチンによる腸管壁内神経叢の発生学的研究:先天性巨大結腸症の病因に関連して

Levchin 对肠壁间神经丛的胚胎学研究：与先天性巨结肠发病机制的关系

• 批准号: 08771550
• 负责人: 田中 裕之
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771550/
• 关键词: 複合糖質; ヒルシュスプルング病; アウエルバッハ神経叢; レクチン; 神経節細胞

ヒルシュスプルング病は、正常な腸管蠕動運動が先天的に欠如するので、腸管内容がより口側の正常腸管内に貯留停滞し、腸管閉塞症状をきたす疾患である。Neural crestより発生した腸管壁内神経節細胞は、ヒトの場合、胎生5週頃迷走神経幹より食道、胃、小腸を経て下降していき、胎生12週頃には直腸下端まで達するとされている。この経過中、何らかの原因で神経節細胞の下降に障害が生ずると、停止した部位より肛門側の腸管部で本症が発生するとされている。一方、従来より、この腸管壁神経叢の発生や分化に、複合糖質が深く関与していると報告されている。今回我々は、壁内神経節細胞発生過程における複合糖質の変化を、特定の糖構造と特異的に結合するレクチンを用いて検討した。方法:Wistar系ラット胎仔(胎生15日〜21日),生後3日,成体(各3個体)の骨盤部を摘出し,2.5%グルタルアルデヒド固定後、光顕観察にはパラフィン切片(4μm),電顕観察には凍結切片(40μm)を作製した。レクチン染色法として、光顕的にはABC法を用い,電顕的にはHRP標識レクチンを用いた包埋前染色法を適用した。用いたレクチンは,ConA,WGA,PNA,SBA,UEA-1,DBA,LCA,PHA-L,DSA,GS-1,VVA,MPA,BPA及びPSAの14種類である。反応特異性を、それぞれのレクチンに対する特異的阻害糖を添加することにより確認した。また,反応強度は、陰性(-)、弱陽性(【.+-。】)、陽性(+)、強陽性(++)の4段階に区分して評価した。結果:(1)ConA、DSA、PSA、PHA-L、LCA及びWGAは、胎生期から成体に至る全期間を通じて、結腸壁アウエルバッハ神経叢に一致して反応陽性であった。なかでも、ConAは胎生17〜18日に、DSAは胎生17日以降に反応が増強する傾向を示した。(2)MPAは、胎生15日及び16日には反応陰性であったが、胎生17日以降弱陽性反応を示した。(3)UEA-1、PNA、SBA、GS-1、VVA、BPA及びDBAは、胎生期を通じて反応陰性であった。(4)電顕的には、ConA、DSA及びWGAが、神経細胞形質膜並びに神経繊維形質膜に反応陽性であり、ConAは核膜にも陽性反応を呈した。考察:アウエルバッハ神経叢が明瞭に識別される胎生17日に一致して、ConA、DSAなどのレクチンが認識するN-グリコシド型糖鎖構造が、アウエルバッハ神経叢及びその周囲に増強することが確認され、その局在も明らかとなった。腸管において神経節が分化し、神経繊維のネットワークが形成される初期過程に、N-グリコシド型糖鎖を中心とした複合糖質が重要な役割を担っている可能性が指摘される。

The intestinal tract is characterized by congenital dysfunction of normal intestinal motility, stagnation of intestinal contents, and redness of the intestinal tract. Neuronal crest begins when ganglion cells in the intestinal wall begin to move, and when they move, they move from the esophagus, stomach, and small intestine to the lower rectum at 5 weeks of gestation. The cause of this disease is the decline of ganglion cells, which causes the disease to occur, and the site of cessation, which causes the disease to occur in the anal intestine. The development and differentiation of the intestinal tract nervous system and the complex carbohydrate are closely related to each other. In this paper, we discuss the use of complex glycans, specific glycans, and specific combinations in the development of intramural ganglion cells. Methods:Wistar line fetuses (15 ~ 21 days old), 3 days after birth, adult (3 individuals each) pelvis was extracted, 2.5% of the total weight was fixed, light and frozen sections (4μm) were observed, and frozen sections (40μm) were prepared. The ABC method is applicable to the staining method, and the HRP method is applicable to the staining method. There are 14 kinds of species in the field, such as ConA,WGA,PNA,SBA,UEA-1,DBA,LCA,PHA-L,DSA,GS-1,VVA,MPA,BPA and PSA. Anti-specificity, anti-specificity, anti-specificity, anti- , anti-negative intensity, negative (-), weak positive ([.+-.]), Positive (+), strong positive (++) and four levels of differentiation. Results:(1)ConA, DSA, PSA, PHA-L, LCA and WGA were all positive during the whole period from birth to adulthood, and the colon wall was also positive. The tendency of the fetus to be born on the 17th or 18th day after birth is shown in DSA. (2)MPA, birth on the 15th and 16th day, negative, birth on the 17th day, weak positive. (3)UEA-1, PNA, SBA, GS-1, VVA, BPA and DBA are the most important factors in the development of fetal life. (4)ConA, DSA and WGA are positive for plasma membrane, and ConA is positive for nuclear membrane. The results showed that the N-type glycan chain structure was identified by ConA, DSA and other methods, and the increase in the strength of the nervous system and the cycle was confirmed. The possibility that N-linked glycogen complexes may play an important role in the early stages of gut differentiation and neurogenesis is discussed.

项目成果

田中裕之: "ラット結腸節層発生過程における複合糖質の変化" J.Smath Muscle Res.31(5). 320-322 (1995)

Hiroyuki Tanaka：“大鼠结肠结层发育过程中复合碳水化合物的变化”J.Smath Muscle Res.31(5) (1995)。