耳下腺腺房細胞におけるアミラーゼ開口放出の分子機構

腮腺腺泡细胞淀粉酶胞吐作用的分子机制

• 批准号: 08771625
• 负责人: 吉垣 純子
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771625/
• 关键词: 分泌; 唾液腺; cAMP; 開口放出; 分泌顆粒

本研究では,耳下腺腺房細胞におけるアミラーゼ分泌に関わるタンパク質の検索を行った.我々は,耳下腺腺房細胞の分泌顆粒に,神経伝達質の開口放出に関わるタンパク質であるVAMP-2が存在しており,cAMP依存的なアミラーゼ分泌に関わっていることを既に報告している.しかし,神経細胞においてVAMP-2と相互作用して膜融合に関わっているsyntaxin 1やSNAP-25は,耳下腺では検出されなかった.そこで,本研究では,耳下腺腺房細胞において,アミラーゼ分泌に関わるVAMP-2以外のタンパク質の検出を試みた.特に,VAMP-2の普遍的なホモログであるcellubrevinや,VAMP-2と直接結合すると言われているsyntaxin 4について,解析を行った.そのために,VAMP familyを共通に認識するウサギポリクローナル抗体(anti-SER4256)を作成し,耳下腺の細胞画分についてウエスタンブロットを行った.その結果,anti-SER4256によって認識される15kDa(p15)および18kDa(p18)のバンドが検出された.p18は,抗VAMP-2抗体によって認識されるバンドと分子量が一致しており,VAMP-2であると考えられた.p15及びp18は共に,ボツリヌストキシンBによって切断された.VAMP-1はボツリヌストキシンBによる切断部位は持たないことから,p15はcellubrevinであると考えられる.また,p15はVAMP-2と同様に,分泌顆粒膜に局在しており,アミラーゼ分泌に何らかの関与をしていることが予測される.また,syntaxin familyの中で,VAMP-2に対する結合能を持つものはsyntaxin 1と4であることが既に報告されている.そこで,抗syntaxin 4抗体を用いて,耳下腺の細胞画分についてウエスタンブロットを行った.その結果,抗syntaxin 4抗体によって認識される32kDaのバンドが膜画分に存在することが明らかになった.syntaxin 4は,VAMP-2と協同して刺激応答性のアミラーゼ開口放出に関わっていることが期待される.

In this study, the atrial cells of the subauricular gland were secreted by the subauricular gland. I am sorry that the atrial cells of the subauricular glands secrete particles, and the opening of the subauricular glands opens the mouth to express the presence of VAMP-2, while the cAMP-dependent cells secrete significant information. Membrane fusion, membrane fusion, syntaxin 1 SNAP-25, subauricular gland, subauricular gland, subauricular gland. In this study, the atrial cells of the subauricular gland were not secreted, and the secretion was detected outside of VAMP-2. In this paper, the general information system of VAMP-2 is called "cellubrevin", and the VAMP-2 is directly combined with the word "syntaxin" 4 to parse the data. The antibody (anti-SER4256) was detected in the subauricular gland, and the subauricular gland was divided into two parts. The subauricular gland was divided into two parts. The results showed that anti-SER4256 (p15), 15kDa (p15), 18kDa (p18), anti-VAMP-2 antibody, anti-p18, p15, p18, p VAMP-1

项目成果

吉垣純子: "Vesicle-associated membrane protein 2 is essential for cAMP-regulated exocytosis in rat parotid acinar cells : the inhibition of cAMP-dependent amylase release by botulinum neurotoxin B." Journal of Biological Chemistry. 271. 13130-13134 (1996)

Junko Yoshigaki：“囊泡相关膜蛋白 2 对于大鼠腮腺腺泡细胞中 cAMP 调节的胞吐作用至关重要：肉毒杆菌神经毒素 B 抑制 cAMP 依赖性淀粉酶释放。”《生物化学杂志》271。13130-13134 (1996)。