耳下腺腺房細胞に存在する開口放出関連タンパク質の役割

腮腺腺泡细胞中胞吐作用相关蛋白的作用

• 批准号: 07771677
• 负责人: 吉垣 純子
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771677/
• 关键词: 外分泌; 開口放出; Rab3A; VAMP-2; cAMP; ボツリヌストキシン

本研究では,耳下腺の刺激反応性のアミラーゼ分泌に関わるタンパク質を検索し,その作用機構の解析を試みた.耳下腺のような外分泌については,その分子的なメカニズムがまだほとんど明らかにされていないが,神経細胞における神経伝達物質の分泌についてはそれに関わるタンパク質が多数報告されている.本研究では,それらのタンパク質(シナプトダグミン,シナプトフィジン,シンタキシン,SNAP-25, Rab3A, VAMP-2)にたいする抗体を用い,ラット耳下腺腺房細胞にたいするイムノブロット解析を行った.その結果,Rab3AおよびVAMP-2の抗体と反応するそれぞれ25kDa,18kDaのタンパク質がラット耳下腺腺房細胞の分泌顆粒膜に見いだされた.一方,神経細胞内でVAMP-2と相互作用していることがわかっているシンタキシンおよびSNAP-25は,耳下腺では検出されなかった.さらに,耳下腺以外の外分泌腺(顎下腺,膵臓,涙腺)において,同様の検討を行ったところ,Rab3AおよびVAMP-2は多くの外分泌腺で発現しており,外分泌において共通の機能を果たしていることが示唆された.次に,VAMP-2が本当に耳下腺におけるアミラーゼ分泌に関わっているか調べるために,VAMP-2を特異的に切断するプロテアーゼであるボツリヌストキシンBを用いた実験を行った.ストレプトリシンOを用いて耳下腺腺房細胞を可透過にした状態で,アミラーゼ分泌を測定する系がすでに確立している.その透過性細胞を用いて,ボツリヌストキシンBを細胞内に導入し、アミラーゼ分泌にたいする効果を調べた.その結果,ボツリヌストキシンBは,非刺激時のアミラーゼ分泌には影響がなかったが,cAMP刺激時の分泌量を抑制した.したがって,VAMP-2はcAMP依存的なアミラーゼ開口放出に重要な役割を果たしていると考えられる.

This study aims to explore the mechanism of action and the relationship between the secretion and the response to stimulation of the auricular gland. In the ear gland, the exocrine secretion of the neurotransmitter substance is the most important factor in the molecular secretion of the neurotransmitter. In this study, we analyzed the use of antibodies against all kinds of proteins (SNAP-25, Rab3A, VAMP-2) in auricular gland cells. As a result,Rab3A and VAMP-2 antibodies were isolated from the secretory granular membrane of the salivary gland cells by 25kDa,18kDa protein. On the one hand, VAMP-2 interacts with SNAP-25 in neurons, and on the other hand, SNAP-25 interacts with VAMP-2 in auricular glands. In addition, exocrine glands other than auricular glands (submandibular glands, pectoral glands, and lacrimal glands) are found in the same way, and the same process is carried out. Rab3A and VAMP-2 are found in many exocrine glands, and common functions of exocrine glands are found in the same process. Second,VAMP-2 is essential to the secretion of the auricular gland,VAMP-2 is specific to the secretion of the auricular gland,VAMP-2 is specific to the secretion of the auricular gland,VAMP-2 is specific to the secretion of the auricular gland,VAMP-2 is specific to the secretion of the auricular gland. The cells of the auricular gland can be detected by the method of fluorescence detection. All the permeable cells are used to regulate the intracellular secretion of protein. As a result, the secretion of cAMP was inhibited when cAMP was stimulated. VAMP-2 is cAMP dependent and has an important role in the release of cAMP.