耳下腺腺房細胞においてcAMP依存性開口放出を制御するタンパク質の同定

腮腺腺泡细胞中控制 cAMP 依赖性胞吐作用的蛋白质的鉴定

• 批准号: 13771104
• 负责人: 吉垣 純子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771104/
• 关键词: 耳下腺; cAMP; 開口放出; VAMP2; syntaxin6; リン酸化

唾液分泌は自律神経支配を受けており、水やイオンの分泌とタンパク質の開口放出が様々な神経伝達物質によって制御されている。耳下腺腺房細胞では、β-アドレナリン受容体刺激により細胞内のcAMP濃度が上昇して、アミラーゼ開口放出が引き起こされる。我々は現在までに、耳下腺腺房細胞の分泌顆粒膜上にSNAREタンパク質の一つであるVAMP2が存在しており、cAMP依存性アミラーゼ分泌において重要な役割を果たしていることを報告している。本研究では、VAMP2タンパク質がどのようなメカニズムでcAMP依存性アミラーゼ分泌を制御しているかを調べる目的で、VAMP2と結合するタンパク質の解析を行った。まず、VAMP2との結合能を持つと報告されているタンパク質群の中で、分泌顆粒膜上に存在するタンパク質をウエスタンブロッティングによって同定した。その結果、SNAREタンパク質であるSNAP-23およびsyntaxin6が分泌顆粒膜に存在していることが明らかになった。さらに、pantophysinも分泌顆粒に局在していた。そこで、SNAP-23、syntaxin6、およびpantophysinに対する抗体を用いて、可溶化した耳下腺分泌顆粒膜からの免疫沈降を行った。その結果、抗SNAP-23および抗pnatophysin抗体ではVAMP2の共沈は見られなかったが、抗syntaxin6抗体ではVAMP2の共沈が見られた。したがって、耳下腺分泌顆粒膜上でVAMP2タンパク質がsyntaxin6と結合していることが示された。syntaxin6は、PC12細胞などの内分泌系の細胞で分泌顆粒の成熟過程に関わっていることが報告されている。耳下腺のような外分泌細胞でも分泌顆粒の形成に関わっている可能性がある。

Salivary secretion is controlled by the brain, and the secretion of water and the release of substances are controlled by the brain. The cells of auricular gland are stimulated by the host, and the cAMP concentration in the cells increases. VAMP2 is present in the secretory granule membrane of auricular gland cells, and cAMP dependent secretion is important in the production of these proteins. In this study, we investigated the regulation of cAMP-dependent secretion of VAMP2 and its binding with VAMP2. The binding energy of VAMP2 is reported to exist in the middle of the secretory granule membrane. SNAP-23 and syntaxin6 are secreted granule membrane. Pantophysin secretes granules in the body. SNAP-23, syntaxin6, and pantophysin are used to solubilize the secretory granular membrane of the auricular gland. The results showed that anti-SNAP-23 and anti-pnatophysin antibodies were found in the co-precipitation of VAMP2, and anti-syntaxin 6 antibodies were found in the co-precipitation of VAMP2. VAMP2, syntaxin6, syntaxin 7, syntaxin 8, syntaxin 9, syntaxin 9, syn Syntaxin6 and PC12 cells are involved in the maturation of secretory granules in endocrine cells. The possibility of formation of secretory granules in exocrine cells of auricular gland is discussed.

项目成果

Dohke, Y., Fujita-Yoshigaki, J., Sugiya, H., Furuyama, S., Hara-Yokoyama, M.: "Involvement of phosphlipase D in the cAMP-regulated exocytosis of rat parotid acinar cell"Biochem. Biophys. Res. Comm.. 299. 663-668 (2002)

Dohke，Y.，Fujita-Yoshigaki，J.，Sugiya，H.，Furuyama，S.，Hara-Yokoyama，M.：“磷脂酶 D 参与大鼠腮腺腺泡细胞 cAMP 调节的胞吐作用”Biochem。

Hara-Yokoyama, M.: "Complex gangliosides as cell surface inhibitors for the ecto-NAD^+ glycohydrolase of CD38"Biochemistry. 40. 888-895 (2001)

Hara-Yokoyama，M.：“复合神经节苷脂作为 CD38 的外-NAD 糖水解酶的细胞表面抑制剂”生物化学。