耳下腺腺房細胞においてcAMP依存性開口放出を制御するタンパク質の同定

腮腺腺泡细胞中控制 cAMP 依赖性胞吐作用的蛋白质的鉴定

• 批准号: 13771104
• 负责人: 吉垣 純子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771104/
• 关键词: 耳下腺; cAMP; 開口放出; VAMP2; syntaxin6; リン酸化

唾液分泌は自律神経支配を受けており、水やイオンの分泌とタンパク質の開口放出が様々な神経伝達物質によって制御されている。耳下腺腺房細胞では、β-アドレナリン受容体刺激により細胞内のcAMP濃度が上昇して、アミラーゼ開口放出が引き起こされる。我々は現在までに、耳下腺腺房細胞の分泌顆粒膜上にSNAREタンパク質の一つであるVAMP2が存在しており、cAMP依存性アミラーゼ分泌において重要な役割を果たしていることを報告している。本研究では、VAMP2タンパク質がどのようなメカニズムでcAMP依存性アミラーゼ分泌を制御しているかを調べる目的で、VAMP2と結合するタンパク質の解析を行った。まず、VAMP2との結合能を持つと報告されているタンパク質群の中で、分泌顆粒膜上に存在するタンパク質をウエスタンブロッティングによって同定した。その結果、SNAREタンパク質であるSNAP-23およびsyntaxin6が分泌顆粒膜に存在していることが明らかになった。さらに、pantophysinも分泌顆粒に局在していた。そこで、SNAP-23、syntaxin6、およびpantophysinに対する抗体を用いて、可溶化した耳下腺分泌顆粒膜からの免疫沈降を行った。その結果、抗SNAP-23および抗pnatophysin抗体ではVAMP2の共沈は見られなかったが、抗syntaxin6抗体ではVAMP2の共沈が見られた。したがって、耳下腺分泌顆粒膜上でVAMP2タンパク質がsyntaxin6と結合していることが示された。syntaxin6は、PC12細胞などの内分泌系の細胞で分泌顆粒の成熟過程に関わっていることが報告されている。耳下腺のような外分泌細胞でも分泌顆粒の形成に関わっている可能性がある。

Saliva secretion is controlled by the God of self-discipline, which is controlled by the God of saliva, and the water is controlled by the God of saliva, which is controlled by the God of saliva. The atrial cells of the subauricular gland were stimulated by the capacitive body, and the intracellular cAMP of the subauricular gland was stimulated by the receptor. the opening of the atrial cell of the subauricular gland was released from the opening of the atrial cell of the subauricular gland. We now know that the cells of the subauricular glands secrete SNARE on the granule membrane, the presence of VAMP2, the presence of cAMP dependence, the secretion of important fruit, the report of the report. The purpose of this study is to determine the effect of VAMP2 on cAMP dependence. In this study, VAMP2 is used to analyze the relationship between the secretion of DNA and the expression of DNA in this study. The combination of VAMP2Bs and VAMP2Bs can be used to determine whether there is a problem on the membrane of the granule, which is the same as in the report. The results showed that there was a significant difference in the secretion of granule membrane between SNARE and SNAP-23. The membrane was secreted by syntaxin6. The secretion of particles by pantophysin is in the process of infection. The antibody was detected by Elisa, SNAP-23, syntaxin6, SNAP-23, syntaxin6, antibody and soluble antibody. The subauricular gland secreted granule membrane and immuno-sedimentation. The results showed that anti-SNAP-23 antibody, anti-pnatophysin antibody and anti-syntaxin6 antibody were co-precipitated and co-precipitated. The subauricular gland secreted VAMP2 and syntaxin6 on the granule membrane in combination with the subauricular gland. The endocrine system of syntaxin6 and PC12 cells secrete mature cells. The process of maturation. The subauricular gland exocrine exocrine cells secrete granules to form a possibility.

项目成果

Dohke, Y., Fujita-Yoshigaki, J., Sugiya, H., Furuyama, S., Hara-Yokoyama, M.: "Involvement of phosphlipase D in the cAMP-regulated exocytosis of rat parotid acinar cell"Biochem. Biophys. Res. Comm.. 299. 663-668 (2002)

Dohke，Y.，Fujita-Yoshigaki，J.，Sugiya，H.，Furuyama，S.，Hara-Yokoyama，M.：“磷脂酶 D 参与大鼠腮腺腺泡细胞 cAMP 调节的胞吐作用”Biochem。

Hara-Yokoyama, M.: "Complex gangliosides as cell surface inhibitors for the ecto-NAD^+ glycohydrolase of CD38"Biochemistry. 40. 888-895 (2001)

Hara-Yokoyama，M.：“复合神经节苷脂作为 CD38 的外-NAD 糖水解酶的细胞表面抑制剂”生物化学。