耳下腺腺房細胞においてcAMP依存性開口放出を制御するタンパク質の同定

腮腺腺泡细胞中控制 cAMP 依赖性胞吐作用的蛋白质的鉴定

• 批准号: 13771104
• 负责人: 吉垣 純子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771104/
• 关键词: 耳下腺; cAMP; 開口放出; VAMP2; syntaxin6; リン酸化

唾液分泌は自律神経支配を受けており、水やイオンの分泌とタンパク質の開口放出が様々な神経伝達物質によって制御されている。耳下腺腺房細胞では、β-アドレナリン受容体刺激により細胞内のcAMP濃度が上昇して、アミラーゼ開口放出が引き起こされる。我々は現在までに、耳下腺腺房細胞の分泌顆粒膜上にSNAREタンパク質の一つであるVAMP2が存在しており、cAMP依存性アミラーゼ分泌において重要な役割を果たしていることを報告している。本研究では、VAMP2タンパク質がどのようなメカニズムでcAMP依存性アミラーゼ分泌を制御しているかを調べる目的で、VAMP2と結合するタンパク質の解析を行った。まず、VAMP2との結合能を持つと報告されているタンパク質群の中で、分泌顆粒膜上に存在するタンパク質をウエスタンブロッティングによって同定した。その結果、SNAREタンパク質であるSNAP-23およびsyntaxin6が分泌顆粒膜に存在していることが明らかになった。さらに、pantophysinも分泌顆粒に局在していた。そこで、SNAP-23、syntaxin6、およびpantophysinに対する抗体を用いて、可溶化した耳下腺分泌顆粒膜からの免疫沈降を行った。その結果、抗SNAP-23および抗pnatophysin抗体ではVAMP2の共沈は見られなかったが、抗syntaxin6抗体ではVAMP2の共沈が見られた。したがって、耳下腺分泌顆粒膜上でVAMP2タンパク質がsyntaxin6と結合していることが示された。syntaxin6は、PC12細胞などの内分泌系の細胞で分泌顆粒の成熟過程に関わっていることが報告されている。耳下腺のような外分泌細胞でも分泌顆粒の形成に関わっている可能性がある。

Saliva secretion is controlled by the autonomic nervous system and is controlled by water secretion and water secretion. The opening of the material is released, and the material is released. Subauricular gland cells, β-Analysis receptors, stimulate the concentration of cAMP in the cells to increase, and the amotor cells open to release the acetaminophen. I'm using the SNARE material on the secretory granule membrane of subauricular gland cells now. VAMP2 Existence of しており, cAMP dependence アミラーゼ secretion において important なservice cut をfruit たしていることを report している. The purpose of this study is to determine the dependence of VAMP2 VAMP2 on cAMP The purpose of secretion is to control the secretion, and the analysis of VAMP2 and the quality of VAMP2 is to be done.まず、VAMP2 binding energy をholding つと report されているタンパクmass group の中で、secretion There is a するタンパク性をウエスタンブロッティングによって同定した on the particle membrane.そのRESULTS, SNAREタンパクqualityであるSNAP-23およびsyntaxin6がsecreted granule membraneにexistingしていることが明らかになった.さらに, pantophysin も secretion granules にbureau in していた.そこで, SNAP-23, syntaxin6, およびpantophysin に対するantibody をいて, soluble したsubauricular gland secretion granule membrane からのimmunoprecipitation を行った.その results, anti-SNAP-23 およびanti-pnatophysin antibody ではVAMP2のco-precipitation は见られなかったが, anti-syntaxin6 antibody ではVAMP2 の co-precipitation が见られた.したがって, subauricular gland secretion granule membrane でVAMP2 タンパクquality がsyntaxin6とcombine していることが Show された. The maturation process of syntaxin6 and PC12 cells in endocrine cells and secretory granules has been reported by the company. The formation of exocrine cells and secretory granules of the subauricular gland is possible.

项目成果

Dohke, Y., Fujita-Yoshigaki, J., Sugiya, H., Furuyama, S., Hara-Yokoyama, M.: "Involvement of phosphlipase D in the cAMP-regulated exocytosis of rat parotid acinar cell"Biochem. Biophys. Res. Comm.. 299. 663-668 (2002)

Dohke，Y.，Fujita-Yoshigaki，J.，Sugiya，H.，Furuyama，S.，Hara-Yokoyama，M.：“磷脂酶 D 参与大鼠腮腺腺泡细胞 cAMP 调节的胞吐作用”Biochem。

Hara-Yokoyama, M.: "Complex gangliosides as cell surface inhibitors for the ecto-NAD^+ glycohydrolase of CD38"Biochemistry. 40. 888-895 (2001)

Hara-Yokoyama，M.：“复合神经节苷脂作为 CD38 的外-NAD 糖水解酶的细胞表面抑制剂”生物化学。