耳下腺腺房細胞においてcAMP依存性開口放出を制御するタンパク質の同定

腮腺腺泡细胞中控制 cAMP 依赖性胞吐作用的蛋白质的鉴定

• 批准号: 13771104
• 负责人: 吉垣 純子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771104/
• 关键词: 耳下腺; cAMP; 開口放出; VAMP2; syntaxin6; リン酸化

唾液分泌は自律神経支配を受けており、水やイオンの分泌とタンパク質の開口放出が様々な神経伝達物質によって制御されている。耳下腺腺房細胞では、β-アドレナリン受容体刺激により細胞内のcAMP濃度が上昇して、アミラーゼ開口放出が引き起こされる。我々は現在までに、耳下腺腺房細胞の分泌顆粒膜上にSNAREタンパク質の一つであるVAMP2が存在しており、cAMP依存性アミラーゼ分泌において重要な役割を果たしていることを報告している。本研究では、VAMP2タンパク質がどのようなメカニズムでcAMP依存性アミラーゼ分泌を制御しているかを調べる目的で、VAMP2と結合するタンパク質の解析を行った。まず、VAMP2との結合能を持つと報告されているタンパク質群の中で、分泌顆粒膜上に存在するタンパク質をウエスタンブロッティングによって同定した。その結果、SNAREタンパク質であるSNAP-23およびsyntaxin6が分泌顆粒膜に存在していることが明らかになった。さらに、pantophysinも分泌顆粒に局在していた。そこで、SNAP-23、syntaxin6、およびpantophysinに対する抗体を用いて、可溶化した耳下腺分泌顆粒膜からの免疫沈降を行った。その結果、抗SNAP-23および抗pnatophysin抗体ではVAMP2の共沈は見られなかったが、抗syntaxin6抗体ではVAMP2の共沈が見られた。したがって、耳下腺分泌顆粒膜上でVAMP2タンパク質がsyntaxin6と結合していることが示された。syntaxin6は、PC12細胞などの内分泌系の細胞で分泌顆粒の成熟過程に関わっていることが報告されている。耳下腺のような外分泌細胞でも分泌顆粒の形成に関わっている可能性がある。

唾液分泌是自主神经支配的，水和离子的分泌以及蛋白质的释放由多种神经递质控制。在腮腺细胞中，β-肾上腺素受体刺激增加了细胞内cAMP的浓度，从而导致淀粉酶开口释放。迄今为止，我们报告说，VAMP2是一种蛋白质蛋白之一，存在于腮腺腺泡细胞的分泌颗粒上，并且在依赖CAMP依赖性淀粉酶分泌中起着重要作用。在这项研究中，我们分析了与VAMP2结合的蛋白质，以研究VAMP2蛋白调节CAMP依赖性淀粉酶分泌的机制。首先，在据报道具有与VAMP2结合的蛋白质中，通过蛋白质印迹鉴定出分泌颗粒上存在的蛋白质。结果表明，SNARE蛋白Snap-23和Syntaxin6存在于分泌颗粒中。此外，Pantophysin还定位为分泌颗粒。因此，使用SNAP-23，Syntaxin6和Pantophysin的抗体用于从溶解的腮腺分泌颗粒中免疫蛋白质。结果，在抗SNAP-23和抗PNATOPHYSIN抗体中未观察到VAMP2的共沉淀，但是在抗Sytraxin6抗体中观察到VAMP2的共沉淀。因此，结果表明，VAMP2蛋白在腮腺分泌颗粒上与语法6结合。据报道，语法参与内分泌细胞（例如PC12细胞）分泌颗粒的成熟过程。外分泌细胞（例如腮腺）也可能参与分泌颗粒的形成。

项目成果

Dohke, Y., Fujita-Yoshigaki, J., Sugiya, H., Furuyama, S., Hara-Yokoyama, M.: "Involvement of phosphlipase D in the cAMP-regulated exocytosis of rat parotid acinar cell"Biochem. Biophys. Res. Comm.. 299. 663-668 (2002)

Dohke，Y.，Fujita-Yoshigaki，J.，Sugiya，H.，Furuyama，S.，Hara-Yokoyama，M.：“磷脂酶 D 参与大鼠腮腺腺泡细胞 cAMP 调节的胞吐作用”Biochem。

Hara-Yokoyama, M.: "Complex gangliosides as cell surface inhibitors for the ecto-NAD^+ glycohydrolase of CD38"Biochemistry. 40. 888-895 (2001)

Hara-Yokoyama，M.：“复合神经节苷脂作为 CD38 的外-NAD 糖水解酶的细胞表面抑制剂”生物化学。