外分泌細胞における余剰分泌顆粒の安全な処理機構としてのクリノファジーの役割

噬菌体作为外分泌细胞中多余分泌颗粒的安全处理机制的作用

• 批准号: 21K09836
• 负责人: 吉垣 純子
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09836/
• 关键词: クリノファジー; 唾液腺; 分泌顆粒; タンパク質分解; オートファジー; シェーグレン症候群

唾液腺腺房細胞における分泌顆粒の処理機構を解析するために，唾液タンパク質であるシスタチンD（Cst5）とHaloTagとの融合タンパク質（Cst5-Halo）を耳下腺初代培養細胞に発現させ，細胞内半減期の測定を行った。Cst5-Haloを発現した細胞をHaloTag TMRリガンドでラベルした後，未結合リガンドを除去し，0-8時間培養を行った。細胞を回収し，残存するTMRラベルされたCst5-Haloの量の変化を測定したところ，細胞内半減期は約３時間であった。次に，形成されてから時間が経過した分泌顆粒と新規に形成された顆粒の細胞内動態の違いを解析するために，Cst5-Haloを発現した唾液腺初代培養細胞をTMRリガンドでラベル後，未結合のリガンドを除去し3-24時間培養した。その後，Oregon Greenリガンドでラベルして，新旧の分泌顆粒の染め分けを試みた。時間経過と共にOregon Green 陽性の分泌顆粒は増えたが，24時間後でもTMRでラベルされた分泌顆粒が観察された。唾液腺の分泌顆粒はβアドレナリン受容体刺激で開口放出が促進される。新旧の分泌顆粒の分泌能を調べるために，TMRリガンドでラベルした後，未結合リガンドを除去し，3-6時間培養してからβアゴニストであるイソプロテレノール非存在下および存在下でインキュベートした。細胞と培地を回収しAlexaFluor 660リガンドでラベル後，電気泳動してゲルイメージングでそれぞれの色素でラベルされたCst5-Haloの分泌量を求めた。その結果，TMRラベルされたCst5-HaloはAlexaFluor 660ラベルされたCst5-Haloよりも非刺激時の分泌量が高かった。したがって，古くなった分泌顆粒は分泌刺激による制御を受けにくくなっていることが予想された。

Room salivary gland cells に お け る secretory granules の 処 manage institution を parsing す る た め に, saliva タ ン パ ク qualitative で あ る シ ス タ チ ン D (Cst5) と HaloTag と の fusion タ ン パ ク mass (Cst5 - Halo) を parotid original culture cell に 発 now さ せ, half life in the cell の line measurement を っ た. Cst5 - Halo を 発 now し た cells を HaloTag TMR リ ガ ン ド で ラ ベ ル し た, not combine リ ガ ン ド を remove し, 0 to 8 time line cultivate を っ た. Cell を back 収 し, residual す る TMR ラ ベ ル さ れ た Cst5 - Halo の quantity の variations change を determination し た と こ ろ, half life in the cell は about 3 time で あ っ た. に, forming さ れ て か ら time が 経 too し た secretory granules と new rules に form さ れ た particle dynamic の cell の violations い を parsing す る た め に, Cst5 - Halo を 発 now し た salivary glands in the early generation of cultured cells を TMR リ ガ ン ド で ラ ベ ル, not combine の リ ガ ン ド を remove し 3-24 time cultivating し た. After そ そ, Oregon Greenリガ ドでラベ ドでラベ て て て stain the new and old secretory particles <e:1> め points けを test みた. Time 経 と altogether に Oregon Green positive の secretory granules は raised え た が, after 24 time で も TMR で ラ ベ ル さ れ た secretory granules が 観 examine さ れ た. The secretory granules of the salivary glands アドレナリ βアドレナリ are stimulated by the volume で to open and release が to promote される. The old and new の can secrete a particle の を adjustable べ る た め に, TMR リ ガ ン ド で ラ ベ ル し た, not combined with リ ガ ン ド を remove し, 3 to 6 time cultivating し て か ら beta ア ゴ ニ ス ト で あ る イ ソ プ ロ テ レ ノ ー ル the presence of お よ び presence で イ ン キ ュ ベ ー ト し た. Cell と petty を back 収 し AlexaFluor 660 リ ガ ン ド で ラ ベ ル after bathing electrical 気 し て ゲ ル イ メ ー ジ ン グ で そ れ ぞ れ の pigment で ラ ベ ル さ れ た Cst5 - Halo の secretion を o め た. そ の results, TMR ラ ベ ル さ れ た Cst5 - Halo は AlexaFluor 660 ラ ベ ル さ れ た Cst5 - Halo よ り も の when not stimulate secretion が high か っ た. Youdaoplaceholder0, the ancient くなった secretory granules くなった secretory stimulation による control を is influenced by けにくくなって る る とが とが to された.

项目成果

唾液腺細胞内輸送の多重蛍光解析-ChemiDoc MPイメージングシステムの活用

唾液腺细胞内运输的多重荧光分析 - ChemiDoc MP 成像系统的利用

• 发表时间: 2022
• 作者: Fujita-Yoshigaki J;Yokoyama M;Katsumata-Kato O;吉垣 純子，横山 愛，加藤 治
• 通讯作者: 吉垣 純子，横山 愛，加藤 治

日本大学松戸歯学部生理学講座

日本大学松户牙科学院生理学系

The role of Ca2+-dependent aggregation of cargo proteins in selective transport of salivary acinar cells

货物蛋白 Ca2 依赖性聚集在唾液腺泡细胞选择性运输中的作用

• 发表时间: 2023
• 作者: Fujita-Yoshigaki J;Yokoyama M;Katsumata-Kato O
• 通讯作者: Katsumata-Kato O

耳下腺腺房細胞における分泌タンパク質の選別機構

腮腺腺泡细胞分泌蛋白的分选机制

• 发表时间: 2022
• 作者: Fujita-Yoshigaki J;Yokoyama M;Katsumata-Kato O;吉垣 純子，横山 愛，加藤 治;加藤 治，横山 愛，吉垣 純子;吉垣 純子，横山 愛，加藤 治
• 通讯作者: 吉垣 純子，横山 愛，加藤 治

プロカテプシンBを指標にしたラット耳下腺における新規生成顆粒の分泌能の検討

以组织蛋白酶B为指标检测大鼠腮腺新生颗粒的分泌能力

• 发表时间: 2022
• 作者: Fujita-Yoshigaki J;Yokoyama M;Katsumata-Kato O;吉垣 純子，横山 愛，加藤 治;加藤 治，横山 愛，吉垣 純子
• 通讯作者: 加藤 治，横山 愛，吉垣 純子