外分泌細胞における余剰分泌顆粒の安全な処理機構としてのクリノファジーの役割

噬菌体作为外分泌细胞中多余分泌颗粒的安全处理机制的作用

基本信息

批准号：
21K09836
负责人：
吉垣純子
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

唾液腺腺房細胞における分泌顆粒の処理機構を解析するために，唾液タンパク質であるシスタチンD（Cst5）とHaloTagとの融合タンパク質（Cst5-Halo）を耳下腺初代培養細胞に発現させ，細胞内半減期の測定を行った。Cst5-Haloを発現した細胞をHaloTag TMRリガンドでラベルした後，未結合リガンドを除去し，0-8時間培養を行った。細胞を回収し，残存するTMRラベルされたCst5-Haloの量の変化を測定したところ，細胞内半減期は約３時間であった。次に，形成されてから時間が経過した分泌顆粒と新規に形成された顆粒の細胞内動態の違いを解析するために，Cst5-Haloを発現した唾液腺初代培養細胞をTMRリガンドでラベル後，未結合のリガンドを除去し3-24時間培養した。その後，Oregon Greenリガンドでラベルして，新旧の分泌顆粒の染め分けを試みた。時間経過と共にOregon Green 陽性の分泌顆粒は増えたが，24時間後でもTMRでラベルされた分泌顆粒が観察された。唾液腺の分泌顆粒はβアドレナリン受容体刺激で開口放出が促進される。新旧の分泌顆粒の分泌能を調べるために，TMRリガンドでラベルした後，未結合リガンドを除去し，3-6時間培養してからβアゴニストであるイソプロテレノール非存在下および存在下でインキュベートした。細胞と培地を回収しAlexaFluor 660リガンドでラベル後，電気泳動してゲルイメージングでそれぞれの色素でラベルされたCst5-Haloの分泌量を求めた。その結果，TMRラベルされたCst5-HaloはAlexaFluor 660ラベルされたCst5-Haloよりも非刺激時の分泌量が高かった。したがって，古くなった分泌顆粒は分泌刺激による制御を受けにくくなっていることが予想された。

为了分析唾液腺泡细胞中分泌颗粒加工的机制，在原发性的腮腺培养细胞中表达了胱抑素D（CST5）和Halotag（CST5）和Halotag（CST5-HALO）的融合蛋白，并测量了细胞内半衰期。表达CST5-HALO的细胞用Halotag TMR配体标记，并去除未结合的配体并培养0-8小时。收集细胞，并测量剩余TMR标记的CST5-HALO的变化，细胞内半衰期约为3小时。接下来，为了分析已经形成并新形成的颗粒之间细胞内动力学的差异，将表达CST5-HALO的唾液腺的原代细胞用TMR配体标记，并取出未结合的配体并培养3-24小时。之后，我们试图将分泌颗粒标记为俄勒冈州绿色配体，并在之前和之后染色。随着时间的流逝，俄勒冈绿色的阳性分泌颗粒增加，但即使在24小时后，也观察到TMR标记的分泌颗粒。唾液腺的分泌颗粒被刺激以通过β-肾上腺素能受体刺激公开释放。为了研究新旧分泌颗粒的分泌能力，在用TMR配体标记后，除去未结合的配体，培养3-6小时，然后在缺乏和存在beta agonist的情况下孵育。收集细胞和培养基，用Alexafluor 660配体标记，然后进行电泳，以确定通过凝胶成像标记的每种染料标记的CST5-HALO量。结果，与Alexafluor 660标记的CST5-HALO相比，TMR标记的CST5-HALO在不刺激期间分泌更多。因此，据预测，过时的分泌颗粒不太可能由分泌刺激控制。

项目成果

期刊论文数量（8）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

日本大学松戸歯学部生理学講座

日本大学松户牙科学院生理学系

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

唾液腺細胞内輸送の多重蛍光解析-ChemiDoc MPイメージングシステムの活用

唾液腺细胞内运输的多重荧光分析 - ChemiDoc MP 成像系统的利用

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Fujita-Yoshigaki J;Yokoyama M;Katsumata-Kato O;吉垣　純子，横山　愛，加藤　治
通讯作者：
吉垣　純子，横山　愛，加藤　治

耳下腺腺房細胞における分泌タンパク質の選別機構

腮腺腺泡细胞分泌蛋白的分选机制

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Fujita-Yoshigaki J;Yokoyama M;Katsumata-Kato O;吉垣　純子，横山　愛，加藤　治;加藤　治，横山　愛，吉垣　純子;吉垣　純子，横山　愛，加藤　治
通讯作者：
吉垣　純子，横山　愛，加藤　治

The role of Ca2+-dependent aggregation of cargo proteins in selective transport of salivary acinar cells

货物蛋白 Ca2 依赖性聚集在唾液腺泡细胞选择性运输中的作用

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
Fujita-Yoshigaki J;Yokoyama M;Katsumata-Kato O
通讯作者：
Katsumata-Kato O

ラット耳下腺の顆粒形成・成熟と臓器アミラーゼ比活性の関係

大鼠腮腺颗粒形成/成熟与器官淀粉酶比活性的关系

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Fujita-Yoshigaki J;Yokoyama M;Katsumata-Kato O;吉垣　純子，横山　愛，加藤　治;加藤　治，横山　愛，吉垣　純子;吉垣　純子，横山　愛，加藤　治;加藤　治，横山　愛，吉垣　純子;水野博司;吉垣　純子，横山　愛，加藤　治;加藤　治，横山　愛，吉垣　純子
通讯作者：
加藤　治，横山　愛，吉垣　純子

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IKEO T