中枢神経系の性分化におけるアロマターゼの機能に関する研究

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脳内アロマターゼの機能に関して、遺伝子破壊マウスの作成および遺伝子発現を調節する転写因子の固定という2つの観点から、以下の研究を行なった。1)マウス・アロマターゼ遺伝子には、少なくとも脳および卵巣特異的な2つのエクソン1が存在し多重エクソンを構成している。そこで脳アロマターゼの機能を選択的に領域を欠損させるため、本遺伝子の脳特異的エクソン1およびプロモーターを含む欠損するよう構築したベクターを用い、遺伝子ターゲッティングを行った。スクリーニンングによって得られた6個の相同的組み換えES細胞クローンから、発生工学的手法によりキメラマウスを作製した。今後、得られたキメラマウスを用いて脳アロマターゼ機能欠損マウスを作製し、その性行動および内分泌パターンの変化を調べる予定である。2)マウス脳特異的プロモーター活性の解析を胎児脳初代培養細胞を用いて行い、高い活性を示す上流約200bpの領域がコアプロモーターを形成することを示した。DNaseIフットプリント法、ゲル移動度シフト法を用いて-200bp領域内に結合する胎児脳核抽出液中の因子の解析を行い、Aα、Aβ、B-サイトの3つの異なる結合配列の存在を明らかとした。B-サイトは塩基配列や競合実験より、C/EBPファミリーの結合配列であることが示唆された。他のふたつのサイトには、未知のタンパク性因子が相互作用していた。Aα結合活性は測定したすべての臓器において検出された。Aβ結合活性は脳、肝臓、腎臓などで検出されたが、副腎、精巣、卵巣などには認められなかった。また脳においてのAβ結合活性は胎児期から新生児期にかけて高く、成体ではほとんど存在していなかった。さらにこれらのサイトの変異によりプロモーター活性は著しく低下することから、これらがシスエレメントとして脳アロマターゼの発現調節に関わっていることが明らかとなった。