中枢神経系の性分化におけるアロマターゼの機能に関する分子遺伝学的研究

芳香酶在中枢神经系统性分化中作用的分子遗传学研究

• 批准号: 07780547
• 负责人: 本田 伸一郎
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780547/
• 关键词: アロマターゼ; 性分化; 遺伝子発現

脳内アロマターゼの機能に関して、遺伝子破壊マウスの作成および遺伝子発現を調節する転写因子の同定という2つの観点から、以下の研究を行なった。1)マウス・アロマターゼ遺伝子の脳および卵巣特異的エクソン1の存在を示し、エクソン1が多重エクソンを構成していることを明らかとした。さらに、本遺伝子の卵巣のエクソン1,2およびプロモーターを含む領域を欠損するようターゲッティングベクターを構築し、ES細胞に導入した。PCRおよびサザンブロットによって相同的組み換えをおこしたES細胞クローンをスクリーニンングすることにより、最終的に11個の目的クローンを得た。これらのクローンから発生工学的手法を用いて10匹のキメラマウスを作製した。今後、得られたキメラマウスを用いてアロマターゼ機能欠損マウスを作製し、その性行動および内分泌パターンの変化を調べる予定である。2)マウス脳特異的エクソン1の発現をRT-PCR-サザンブロットで調べ、このエクソンが、脳の視床下部および扁桃体においてのみ発現し、卵巣、精巣、胎盤、脂肪組織等では発現が、認められないことを示した。また、脳特異的プロモーター領域をCAT遺伝子に連結したレポータープラスミドを構築し、胎児脳初代培養細胞に導入してプロモーター活性を測定したところ、上流約200bpを含むものが高い活性を示し、この領域がコアプロモーターを形成するものと考えられる。胎児脳核抽出液を用いたDNaseIフットプリント法にてプロモーター領域の解析を行い、3箇所の保護部位の存在を確認し、Arom-A,B,Cと名付けた。さらに、これらの結合部位には異なる因子が結合することを、ゲルシフトアッセイにより明らかにした。これらエレメントのうちArom-BにはC/EBP結合配列が存在していたが、Arom-A,Cには既報のエレメントは存在していなかった。

The following research was carried out on the function of gene expression, gene expression and gene expression regulation of gene expression factors. 1) The existence of the special In addition, the gene expression of the egg is very important for the construction of ES cells. The PCR was performed on the same set of cells and the final set of 11 target cells. The method of production engineering is used in the middle of 10 minutes. In the future, we will be able to control the sexual behavior and endocrine changes. 2) RT-PCR is used to detect the expression of special protein 1 in the lower part of the optic bed and tonsil, egg, sperm, placenta and subcutaneous fat. The activity of CAT gene was measured in primary cultured fetal cells, and the activity of CAT gene was measured in the upper 200bp. The analysis of fetal nucleus extract by DNase I and DNase II was carried out, and the existence of three protected sites was confirmed. Arom-A,B,C and DNase II were used. The binding site is different from the binding site. The C/EBP junction arrangement exists in Arom-B, Arom-A,C.

项目成果

Kazuyo Yamada: "Regulation of Placenta-specific Expression of the Aromatase Cytochrome P-450 Gene; Involvement of the Trophoblast Specific Element Binding Protein" The Journal of Biological Chemistry. 270. 25064-25069 (1995)

Kazuyo Yamada：“芳香酶细胞色素 P-450 基因胎盘特异性表达的调节；滋养层特异性元件结合蛋白的参与”《生物化学杂志》。