発生工学的手法を用いた脳内アロマターゼの機能に関する研究

利用发育工程方法研究大脑芳香酶的功能

• 批准号: 14770591
• 负责人: 本田 伸一郎
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770591/
• 关键词: エストロゲン; 遺伝子発現; チトクロームP-450; 脳; 性分化; チトクロームP450; トランスジェニックマウス

脳におけるアロマターゼは神経細胞、および時期特異的に発現し、周生期における脳の性分化に深く関わっている。アロマターゼの脳特異的プロモーターは上流200bp領域に強い活性を有し、この中にaroA-I、A-II、そしてBと名付けた3種のシスエレメントが存在する。今回、A-II結合タンパク質を同定し、その性質を明らかにする目的で実験を行なった。A-II結合タンパク質cDNAの単離は、酵母one-ハイブリット法を利用して行なった。単離されたcDNAクローンがコードするタンパク質のA-IIサイトへの結合の解析はゲルシフト法、およびChIP assay法にて行なった。また、脳特異的アロマターゼプロモーター活性に対する影響は、培養細胞を使用して、ルシフェラーゼ遺伝子をレポーターとして解析した。得られた複数のクローンの塩基配列の解析により、核内受容体スーパーファミリーに属する転写因子であるARP1がA-II結合タンパク質である可能性が示唆された。胎生15日目の胎仔間脳部の核抽出液を用いたゲルシフト法におけるシグナルは、抗ARP1抗体によりスーパーシフトした。さらに、ChIP assayを利用した解析により、in vivoにおいてもARP1がアロマターゼプロモーターのA-IIサイトに結合している事が明らかとなった。また、培養細胞を用いた脳アロマターゼのプロモーター活性は、ARP1の発現量依存的に増加した。以上のようにA-II結合タンパク質としてARP1が単離、同定された。一般的にARP1は、種々のプロモーターに対して抑制的に働くが、脳特異的アロマターゼプロモーターに対しては活性化因子として働くことが明らかとなった。

In addition, it is necessary to conduct research on the development and differentiation of neurocytes, and to conduct research on the development and differentiation of neurocytes. There are three kinds of activity in the upper 200bp domain, namely aroA-I, A-II and B. Now, the A-II combination is the same quality, and the nature of the system is clear. A-II binding protein cDNA isolation, yeast one-protein isolation method is used. The analysis of the combination of cDNA and ChIP assay was carried out in the following ways: For example, if you want to use a mouse, you can use a mouse to make a mouse. The possibility of ARP1-A-II binding is demonstrated by the analysis of the base alignment of the complex and the inclusion factor of the nuclear receptor. The nuclear extract from the fetal interspace on the 15th day of birth was used to detect the presence of anti-ARP1 antibodies The ChIP assay is used to analyze ARP1 in vivo, and the A-II assay is used to analyze ARP1 in vivo. The activity of ARP1 in cultured cells was increased depending on the amount of ARP1. The above A-II combination is simple and stable. General ARP1, species, and suppression of the virus, specific ARP 1, and suppression of the virus activation factor

项目成果

Plumari, L.et al.: "Changes in the Arginine-Vasopressin Immunoreactive Systems in Male Mice Lacking a Functional Aromatase Gene"J. Neuroendocrinol.. 14(12). 971-978 (2002)

Plumari, L.等人：“缺乏功能性芳香酶基因的雄性小鼠精氨酸-加压素免疫反应系统的变化”J.

Bakker J. et al.: "The aromatase knockout (ArKO) mouse provides new evidence that estrogen are required for the development of female brain"Steroids and the Nervous System. Vol.1007. 251-262 (2003)

Bakker J. 等人：“芳香酶敲除 (ArKO) 小鼠提供了新的证据，证明女性大脑的发育需要雌激素”类固醇和神经系统。

Matsumoto T. et al.: "Neurological effects of aromatase deficiency in the mouse"J.Steroid Biochem.Mol.Biol.. Vol.86. 257-265 (2003)

Matsumoto T.等人：“小鼠芳香酶缺乏症的神经学影响”J.Steroid Biochem.Mol.Biol..Vol.86。

Bakker, J.et al.: "Sexual partner preference requires a functional aromatase (cyp19) gene in male mice"Horm. Behav.. 42(10). 158-171 (2002)

Bakker, J. 等人：“雄性小鼠的性伴侣偏好需要功能性芳香酶 (cyp19) 基因”Horm.

Relationships between aromatase activity in the brain and gonads and behavioural deficits in homozygous and heterozygous aromatase knockout mice

• DOI: 10.1111/j.1365-2826.2004.01191.x
• 发表时间: 2004-05-01
• 期刊: JOURNAL OF NEUROENDOCRINOLOGY
• 影响因子: 3.2
• 作者: Bakker, J;Baillien, M;Balthazart, J
• 通讯作者: Balthazart, J