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微生物による環境汚染源物質の分解-有機硫黄化合物中の炭素-硫黄結合の酵素的開裂-

微生物分解环境污染物-有机硫化合物中碳硫键的酶裂解-

基本信息

批准号：
09760088
负责人：
大城隆
金额：
$ 0.32万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

本申請者は化石燃料中の環境汚染源物質である有機硫黄化合物のモデル、ジベンゾチオフェン(DBT)の炭素骨格を破壊することなく脱硫できる微生物Rhodococcus erythropolis D-1が生産するDBT脱硫代謝酵素系に関する研究を行っている。この酵素系は3段階から成っているが、その1段目と2段目の酵素反応には基質に直接アタックする酵素蛋白質(DszC,A)以外に、フラビンレダクターゼの添加が必須であることが判明した。当然、R.erythropolis自身もフラビンレダクターゼを有しているが、さらに活性の高い同酵素が他の菌株から得られる可能性がある。今年度の研究においては、DszCと効率よくカップリングするフラビンレダクターゼをスクリーニングし、高生産菌株から同酵素を精製、単離し、その諸性質を決定した。Paenibacillus polymyxa A-1と同定された分離菌株が高い活性を有していたので、この菌株の無細胞抽出液から本酵素をSDS-PAGE上で均一にまで精製した。精製に際して比活性は3,400倍まで上昇し、精製収率は12%であり、サブユニット分子量は25kDaであった。FMN、NADHに対するKm値はそれぞれ1.7μM、425μMと算出され、至適温度は40〜50℃、至適pHは5.5であった。本酵素は40℃までとpH8〜10において安定であった。また、本酵素の活性中心にはNAD^+と電子の授受を行うSH基が存在し、酵素反応はordered bi bi mechanismに従って進行すると推察された。

This applicant is responsible for the study of organic sulfur compounds in the source of environmental pollution in fossil fuels, such as organic sulfur compounds, organic sulfur compounds (DBT), carbon bone compounds (DBT), desulfurization microorganisms, biodegradable DBT desulfurization enzymes. The enzyme system is divided into three segments, the first segment, the second segment, the third segment, the second segment. Of course, the R.erythropolis itself has high homozygosity, high activity, high homoenzyme activity and high activity. In this year's study, the rate of homozygotes, isolates, and sex determinants were determined in this year's study. The rate of DszC was higher than that of homozygous strains. The high activity of Paenibacillus polymyxa Amurl isolates was characterized by homoassay, cell extract, cell extract, enzyme SDS-PAGE and homogenization assay. The specific activity of semen was 3400 times higher than that of semen, the rate of concentrate was 12%, and the molecular weight of 25kDa was 12%. FMN, NADH temperature, Km temperature, temperature, This enzyme is sensitive to pH8~10 at 40 ℃ and diazepam is stable. The active center of this enzyme, the nad ^ + electronic acceptor, the SH base, the enzyme anti-ordered bi bi mechanism, the enzyme, the enzyme.