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ボルナ病ウイルスの人畜共通感染性に関する疫学的ウイルス学的研究

博尔纳病病毒人畜共患病的流行病学和病毒学研究

基本信息

批准号：
09760296
负责人：
堀本泰介
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760296/
关键词：
ボルナ病抗体検査疫学ボルナ病ウイルス疫学調査

项目摘要

元来中央ヨーロッパのウマに進行性脳脊髄炎をひきおこすことで知られていたボルナ病ウイルス(BDV)は、最近になって、人にも感染し、何らかの精神性疾患の原因になる可能性が報告された。このBDVの人畜共通感染性を証明するためには疫学的方法が必須であるが、BDV感染診断法はまだ標準化されていない。本研究では、BDVのヌクレオプロテインp40を抗原とする特異抗体検出法について検討した。融合蛋白(GST/p40)を発現する大腸菌ライセートを抗原としたウエスタンイムノプロット(WIB)法を用いて、国内の健常ウマ野外血清(1:100)を反応させてみると、いくつかでGST/p40との反応がみられ(GST対照とは反応が見られない)、BDV抗体の存在が示唆された。しかし同時に大腸菌由来蛋白との反応も見られたので、反応特異性を確認するためにGST/p40を用いて吸収試験を行ったところ、吸収される検体と吸収されない検体が認められた。前者は抗体とp40との特異的な結合を示唆するが、後者はp40の一次構造依存的な非特異抗体吸着性の存在を示唆している。それでp40に存在する抗原部位および非特異的抗体吸着部位を解析するために、制限酵素切断部位を利用した部分欠損融合蛋白をN末側3種類、C末側4種類大腸菌で発現させ、抗p40モノクローナル抗体、BDV感染参照血清、ウマ野外血清との反応性を調べてみた。その結果、p40には全領域を通じて抗原部位が認められるが、特にN末端側のエピトープに対する抗体が、感染動物血清中に優位に誘導されることが示唆された。一方、p40のC末端側に血清と非特異的な反応を引き起こす領域の存在が推定された。従って、この領域を取り除いたp40抗原がBDV特異抗体の検出に応用できると考えられた。

In recent years, it has been reported that there is a possibility of progressive chiropractic disease (BDV). The zoonotic infectivity of BDV must be demonstrated by epidemiological methods, and the diagnostic methods for BDV infection must be standardized. In this study, we investigated the detection of BDV specific antibodies by antigen-specific p40 assay. Fusion protein (GST/p40) was found in E. coli, and the presence of GST/p40 and BDV antibodies was demonstrated by using the WIB method. In addition, the detection of E. coli origin protein and its specificity were confirmed by GST/p40. The former indicates the specific binding of antibody to p40, while the latter indicates the existence of non-specific antibody adsorption dependent on p40 primary structure. The presence of p40 antigen sites and nonspecific antibody binding sites were analyzed to limit the use of enzyme cleavage sites. Three types of N-terminal fusion proteins and four types of C-terminal Escherichia coli were detected. Anti-p40 antibody, BDV infection reference serum and field serum were used to modulate the reactivity of the fusion proteins. The results showed that p40 could be induced in the serum of infected animals. The presence of non-specific antisera on the C-terminal side of p40 is presumed. The p40 antigen was detected in the presence of BDV specific antibodies.