B細胞分化におけるBtkの役割:Btkトランスジェニックマウスの解析

Btk 在 B 细胞分化中的作用：Btk 转基因小鼠的分析

• 批准号: 09770213
• 负责人: 植原 昭治
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770213/
• 关键词: Btk; トランスジェニックマウス; クラス変換; IL-5; CD38; DNAプロテインキナーゼ; Blimp-1; Bcl-2; チロシンキナーゼ; 免疫不全; 遺伝子治療

本研究は、B細胞に発現しているチロシンキナーゼ、BtkのB細胞発生および分化における役割を明らかにすることを研究目的としている.(1)sIgD陽性の牌臓B細胞を抗CD38抗体、CS/2とIL-5で刺激するとIgMのみならずIgGlの産生が誘導されたが、IgA産生は見られなかった.CS/2やIL-5の単独刺激は無効であった。しかし、腹腔内B細胞をCS/2とIL-5で刺激するとIgGlのみならずIgA産生が見られることがわかった.このことより、B細胞の局在する解剖学的な部位により、B細胞のIgA産生誘導シグナルが異なることがわかった.CS/2と相乗的にB細胞に作用しIgGl産生を惹起するサイトカインを調べたところ、IL-5のみが有効であり、IL-4は無効であった。IL-4やSTAT6遺伝子破壊マウスのB細胞もCS/2とIL-5に応答してIgGlを産生したことから、このシステムはIL-4に非依存性であることがわかった。CS/2刺激されたB細胞をIL-5で刺激するとμからγ1への遺伝子組み替えが惹起されることが、スイッチサークルDNAを増幅し解析してはじめて明らかになった。しかし、CS/2刺激により非翻訳型γ1mRNAの転写が起こるが、μからγ1への遺伝子組み替えは起こらない。クラス変換の頻度とKu70/Ku80複合体の活性化の程度やDNAプロテインキナーゼ活性とは相関しなかった。しかし、興味あることにB細胞特異的な転写因子で、Ig産生細胞への分化に関与すると云われているBlimp-1の発現の程度と相関した。(2)Btkの機能を探るべく、Btk遺伝子破壊マウスに野生型Btk遺伝子導入(Btk^<-/->/Btk^<wt>-Tg)マウスまたは変異Btk遺伝子を導入した(Btk^<-/->/Btk^<xid>-Tg)マウスを作った.いずれのマウスも正常に生まれた.Btk^<-/->マウスで見られたB細胞不全はBtk^<-/->/Btk^<wt>-Tgマウスでは回復していたがBtk^<-/->/Btk^<xid>-Tgマウスでは見られなかった.とりわけ、CS/2とIL-5に依存性のIgG1へのクラス変換は全く見られなかった.これらのことより、BtkはB細胞のクラス変換に重要であることがわかった.

This study は, B cell に 発 now し て い る チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ, Btk の B cells born 発 お よ び differentiation に お け る "を cut Ming ら か に す る こ と を research purpose と し て い る. (1) crucial sIgD positive の brand B cells を CD38 antibody resistance, CS / 2 と IL - 5 で stimulus す る と IgM の み な ら ず IgGl の が lure The production of されたが and IgA is であった as seen in られな られな った った.CS/2やIL-5 <s:1> 単 alone has no effect on であった when stimulated. し か し, intra-abdominal を CS / 2 B cells と IL - 5 で stimulus す る と IgGl の み な ら ず IgA generate が see ら れ る こ と が わ か っ た. こ の こ と よ り の bureau, B cells in す る な parts of the anatomy に よ り の IgA, B cells induced シ グ ナ ル が different な る こ と が わ か っ た. CS/phase 2 と 乗 に に B cells Use し IgGl produce を provoked す る サ イ ト カ イ ン を adjustable べ た と こ ろ, IL - 5 の み が have sharper で あ り, IL - 4 は unseen で あ っ た. IL - 4 や STAT6 heritage 伝 son broken 壊 マ ウ ス の も CS / 2 B cells と IL - 5 に 応 answer し て IgGl を produce し た こ と か ら, こ の シ ス テ ム は IL - 4 に non dependency で あ る こ と が わ か っ た. CS / 2 stimulation さ れ た B cells を IL - 5 で stimulus す る と mu か ら gamma 1 へ の heritage 伝 subgroups み for え が provoked さ れ る こ と が, ス イ ッ チ サ ー ク ル DNA を rights of analytical し し て は じ め て Ming ら か に な っ た. し か し, CS / 2 stimulation に よ り non turn 訳 gamma 1 mrna の planning write が up こ る が, mu か ら gamma 1 へ の heritage 伝 subgroups み for え は up こ ら な い. ク ラ ス variations in の frequency と Ku70 / Ku80 complex の activeness degree の や DNA プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ active と は phase masato し な か っ た. し か し, tumblers あ る こ と に B cell specific な planning write factors で, Ig cell へ の differentiation に masato and す る と cloud わ れ て い る Blimp - 1 の 発 degree is の と phase masato し た. (2) the Btk の function を agent る べ く, Btk but 伝 broken 壊 マ ウ ス に wild-type Btk heritage 伝 son import (Btk ^ < - - > / Btk ^ < wt > - Tg) マ ウ ス ま た は - traces of different Btk 伝 son を import し た (Btk ^ < - - > / Btk ^ < xid > - Tg) マ ウ ス を as っ た. い ず れ の マ ウ ス も Normal に raw ま れ た. Btk ^ < - / - > マ ウ ス で see ら れ た B cells is not complete は Btk ^ < - - > / Btk ^ < wt > - Tg マ ウ ス で は reply し て い た が Btk ^ < - - > / Btk ^ < xid > - Tg マ ウ ス で は see ら れ な か っ た. と り わ け, CS / 2 と IL - 5 に dependency の Ig G1 へ の ク ラ ス variations in は く see all ら れ な か っ た. こ れ ら の こ と よ り, Btk は B cells の ク ラ ス variations in important で に あ る こ と が わ か っ た.

项目成果

Yasue T. et al.: "A critical role of Lyn and Fyn for Bcell responses to CD38 ligation and interleukin-5." Proceedings of National Academy of Science USA. 94. 10307-10312 (1997)

Yasue T. 等人：“Lyn 和 Fyn 对于 B 细胞对 CD38 连接和白细胞介素 5 的反应起着关键作用。”

Mizoguchi C,et al.: "Interleukin-5 Induces lgG1 Isotype Switch Recombination in mouse CD38-Activated slgD-Positive B Lymphocytes." J.Immunol.

Mizoguchi C 等人：“Interleukin-5 在小鼠 CD38 激活的 slgD 阳性 B 淋巴细胞中诱导 lgG1 同型转换重组。”

Numata F.et al.: "The xid mutation plays an important role in delayed development of munne acquired immunodeficiency syndrcme" International Immunology. 9. 139-146 (1997)

Numata F.等人：“xid 突变在小鼠获得性免疫缺陷综合征的延迟发展中发挥着重要作用”《国际免疫学》。