CNR遺伝子クラスターから生じる分泌型遺伝子産物の探索と機能解析

CNR基因簇产生的分泌基因产物的搜索和功能分析

• 批准号: 13035028
• 负责人: 濱田 俊
• 金额: $ 4.8万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13035028/
• 关键词: Cadherin-related Neuronal Receptor; CNR; カドヘリン; プロトカドヘリン; 細胞接着分子; 多様性; 神経科学; 生理活性; 遺伝子; 生体分子; 脳神経

Cadherin-related Neuronal Receptor(CNR)ファミリーの遺伝子産物の多様性について、分泌型と思われる多様化したアイソフォームについて解析を行った。CNRv4(CNR1)の転写産物をreverse transcription-PCR法により増幅したところ、主要な膜結合型アイソフォームであるA型とB型以外にも多数の増幅産物が認められた。これらの産物について塩基配列決定とサザンブロット法による解析を行った結果、大部分が膜貫通領域を欠失したCNRv4のアイソフォームであることが明らかになった。また、ノーザンブロット法でも膜貫通領域近傍の配列を欠いた転写産物群の存在が示唆された。さらに、この様な転写産物は主に脳で検出され、脳以外の組織ではほとんど検出されなかった。また、得られたcDNAの幾つかをHEK293T細胞等に発現させたところ、一部のアイソフォームでは培養上清中に発現蛋白質が検出された。これら分泌型と想定されるアイソフォームが脳内に蛋白質として存在するかどうか検討するため、CNRv4アミノ末端部に対して作成した二種類の抗体を用いて免疫沈降法による検出を試みたが、微量であるためか、検出は困難であった。分泌型産物の大部分は第一カドヘリンドメインを有しており、膜結合型CNRと相互作用することが想定される。このため、その生理活性の検討には膜結合型CNRの機能を明らかにすることが必要であり、現在膜結合型CNRのなかでも主要なアイソフォームであるAおよびB型の遺伝子改変マウスを作成したので、表現型解析を行い、膜結合型の生理機能を明らかにしたいと考えている。

Cadherin-related Neuronal Receptor(CNR) is a complex protein that can be resolved by multiple, secretory, and complex protein products. CNRv4 (CNR1) was amplified by reverse transcription-PCR, and most of the amplified products except for type A and type B were identified. The results of the analysis of the matrix alignment of the product are as follows: most of the membrane penetration areas are missing from CNRv4. The presence of a product group in the vicinity of the membrane penetration field is indicated by the presence of a polymer matrix. In addition, the product of this article is not only the main product, but also the organization of the product. The protein was detected in the supernatant of HEK293T cells and some of them. The secreting type of protein was determined by the method of immunoprecipitation. Most of the secreted products have the first type of interaction, and the membrane-bound CNR interaction has the second type. The physiological activity of membrane-bound CNR is discussed in detail, and the main function of membrane-bound CNR is discussed in detail. The A and B type CNR are modified to make it possible to analyze the phenotype and the physiological function of membrane-bound CNR.

项目成果

Hamada S, Yagi T.: "The cadherin-related neuronal receptor (CNR) family : a novel diversified cadherin family at the synapse"Neuroscience. Res.. 41. 207-215 (2001)

Hamada S、Yagi T.：“钙粘蛋白相关神经元受体 (CNR) 家族：突触处的新型多样化钙粘蛋白家族”神经科学。

Yamazaki Y, Makino H, Hamaguchi-Hamada K, Hamada S.Sugino H, Kawase E, Miyata T, Ogawa M, Yanagimachi R, Yagi, T.: "Assessment of the developmental totipotency of neural cells in the cerebral cortex of mouse embryo by nuclear transfer"Proc Natl Acad Sci U

Yamazaki Y，Makino H，Hamaguchi-Hamada K，Hamada S.Sugino H，Kawase E，Miyata T，Okawa M，Yanagimachi R，Yagi，T.：“小鼠胚胎大脑皮层神经细胞发育全能性的评估

Yagi T, Tada M, Tanaka Y, Senzaki K, Hirayama T, Hamada S, Sugino H: "Diversity of the cadherin-related neuronal receptor family in the nervous system""Genome Science-Towards a New Paradigm?" : International Cpngress Series. 1246. 127-136 (2002)

Yagi T、Tada M、Tanaka Y、Senzaki K、Hirayama T、Hamada S、Sugino H：“神经系统中钙粘蛋白相关神经元受体家族的多样性”“基因组科学-迈向新范式？”