プロテインキナーゼCアイソザイムの血管平滑筋細胞増殖に対する役割

蛋白激酶C同工酶对血管平滑肌细胞增殖的作用

• 批准号: 09770792
• 负责人: 細井 雅之
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770792/
• 关键词: 動脈硬化; プロテインキナーゼC; 細胞増殖; 平滑筋細胞

平滑筋細胞としてラット胸部大動脈由来のA7r5を用いた.A7r5においてはNorthern blottingによってPKC-α,からPにC-まで又Tδの役割を調べるためにPKC-δを過剰発現させることとした。A7r5にコントロールとしてSRDベクター単独またはPKC-δ遺伝子を組み入れたSRD-δをリン酸カルシウム法により遺伝子導入した。導入されたクローンの選択にはネオマイシン耐性遺伝子を利用しG418により行なった。PKC-δの発現の確認はWestern blottingにより確認し、コントロールのSRD単独を導入した細胞クローンより発現の多いクローンを選択し、PKC-δ遺伝子過剰発現平滑筋細胞株の確立した。PKC-アイソザイム遺伝子発現量はWestern blottingにより2.1-3.0倍及びNorthern blottingにより2.0-3.8倍増加していた。また[H^3]PDBu結合量による検討では1.4-1.8倍発現量は増加していた。PKC酵素活性は細胞膜分画及び細胞質分画をDE52イオン交換カラムにて分離後、Ca依存性(conventional PKC),非依存性(novel PKC)のPKCの酵素活性を行なった。conventional PKC活性は膜分画、細胞質分画ともに変化なっかったが、novel PKC活性は細胞質分画では変化なっかったが、膜分画においては22.5+/-2.22pmol/min/mg proteinに対し48.1+/-2.41pmol/min/mg proteinと2倍以上増加していることが確認できた。細胞倍加時間はA7r5およびEシリーズにおいては、37.2±0.8,36.3±4.8時間であったのに対しDシリーズでは65.0±8.4時間と著明に延長しており、DNA合成も有意に抑制されていた。

Smooth muscle cells と し て ラ ッ ト chest artery origin の A7r5 を with い た. A7r5 に お い て は Northern blotting に よ っ て PKC alpha, か ら に P C - ま で adjusted T delta cut を の service べ る た め に PKC - delta を made turning 発 now さ せ る こ と と し た. A7r5 に コ ン ト ロ ー ル と し て SRD ベ ク タ ー 単 alone ま た は PKC - delta heritage 伝 son み を group into れ た SRD - delta を リ ン acid カ ル シ ウ ム method に よ り heritage 伝 son import し た. Import さ れ た ク ロ ー ン の sentaku に は ネ オ マ イ シ ン patience heritage 伝 son を using し G418 に よ り line な っ た. PKC - delta の 発 の now confirmed は Western blotting に よ り confirm し, コ ン ト ロ ー ル の SRD 単 alone を import し た cells ク ロ ー ン よ り 発 の now more い ク ロ ー ン を sentaku し, PKC - delta but 伝 son turning 発 now smooth muscle cell lines の establish し た. PKC - ア イ ソ ザ イ ム posthumous son 伝 発 now quantity は Western blotting に よ り 2.1 3.0 times and び Northern blotting に よ り 2.0 to 3.8 times the rights and し て い た. Youdaoplaceholder0 [H^3] the binding amount of PDBu による検 is about で で 1.4-1.8 times the occurrence amount <e:1> increases て て た た. The activity of PKC enzymes is び cell membrane subdivision and び cytoplasmic subdivision をDE52 <s:1> <s:1> exchange カラムにて after separation, ca-dependent (conventional PKC), non-dependent (novel PKC) <s:1> PKC <s:1> enzyme activity を row なった. But PKC activity は painting, cytoplasmic membrane picture と も に variations change な っ か っ た が, will PKC activity は cytoplasm points draw で は variations change な っ か っ た が, membrane points draw に お い て は 22.5 + / - 2.22 pmol/mg/min Protein に し seaborne 48.1 + / 2.41 pmol/min/mg protein と 2 times more rights and し て い る こ と が confirm で き た. Cells more time は A7r5 お よ び E シ リ ー ズ に お い て は, 37.2 + / - 0.8, 36.3 + / - 4.8 で あ っ た の に し seaborne D シ リ ー ズ で は 65.0 + / - 8.4 と zhao Ming に extended し て お も intentionally に り, DNA synthesis inhibition さ れ て い た.

项目成果

Shinya Fukumoto: "Protein Kinase C δ Inhibits the Proliferation of Vascular Smooth Muscle Cells by Suppressing G_1 Cyclin Expression^*" The Joarnal of Biological Chemisery. Vol.272 No.21. 13816-13822 (1997)

Shinya Fukumoto：“蛋白激酶 C δ 通过抑制 G_1 细胞周期蛋白表达来抑制血管平滑肌细胞的增殖”《生物化学杂志》第 272 卷第 13816-13822 期。