FACSによる選択性を有するウイルスベクターを用いた造血幹細胞への遺伝子導入

使用具有 FACS 选择性的病毒载体将基因转移到造血干细胞中

• 批准号: 09770834
• 负责人: 右田 真
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770834/
• 关键词: 造血幹細胞; AAVベクター; FACS; レトロウイルスベクター; CD24; GFP

我々は昨年まで選択マーカーを有するレトロウイルスベクターの開発を行ってきた。これは、標的細胞にウイルス上清を用いて導入した後に本当に遺伝子が導入がされた細胞のみを選択するシステムを作成しようとするものである。本年はアデノ随伴ウイルスベクター(AAV)においてこの選択システムを確立した。AAVベクターでは神経系細胞への安定した遺伝子導入が可能と考えられる。そこで我々は治療用遺伝子としてASAcDNAを、マーカー遺伝子としてEGFPcDNAを有するAAVベクタープラスミドを作製した。このAAVベクターはベクタープラスミドとパッケージングプラスミド(AAV/Ad)とを同時にHeLa細胞にトランスフェクションし、さらにアデノウイルスを感染させ作成した後に、硫酸セルロースを用いたアフィニティクロマトグラフィーにより精製、濃縮し感染実験を行った。HeLa細胞におけるGFPの発現をFACSで検討したところ、約6%の細胞がGFP陽性であり、陽性細胞が選択可能であることを示し、ASA酵素活性は非導入細胞に比較し1.6倍の増加を認めた。さらにこのベクターがMLD患者由来の皮膚線維芽細胞へも導入が可能であることを確認した。

I 々 は yesterday in ま で sentaku マ ー カ ー を have す る レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー の open 発 を line っ て き た. こ れ は, target cells に ウ イ ル ス supernatant を with い て import し た after the transgression に に heritage 伝 son が import が さ れ た cells の み を sentaku す る シ ス テ ム を made し よ う と す る も の で あ る. This year, アデノ アデノ is accompanied by ウ ウ タ スベ スベ タ タ (AAV)にお にお て て て <s:1> 択システムを to confirm た. AAV ベ ク タ ー で は god 経 cell へ の settle し た posthumous son 伝 import が possible と え ら れ る. そ こ で I 々 は treatment with heritage 伝 son と し て ASAcDNA を, マ ー カ ー posthumous son 伝 と し て EGFPcDNA を have す る AAV ベ ク タ ー プ ラ ス ミ ド を cropping し た. こ の AAV ベ ク タ ー は ベ ク タ ー プ ラ ス ミ ド と パ ッ ケ ー ジ ン グ プ ラ ス ミ ド (AAV/Ad) と を simultaneously に HeLa に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し, さ ら に ア デ ノ ウ イ ル ス を infection さ せ made し た に, acid after セ ル ロ ー ス を with い た ア フ ィ ニ テ ィ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ り refined, concentration The infection of the pathogen を line った. HeLa に お け る GFP の 発 を now both FACS で beg し 検 た と こ ろ, about 6% の cell が GFP positive で あ り, positive cells が sentaku may で あ る こ と を は し ASA and enzyme activity in the import cells に 1.6 times more し の raised plus を recognize め た. さ ら に こ の ベ ク タ ー が MLD origin の patients with skin line d bud cells へ も import が may で あ る こ と を confirm し た.