食道癌組織からのHLA拘束性キラーT細胞株の樹立と癌退縮抗原遺伝子の同定

食管癌组织HLA限制性杀伤T细胞系的建立及癌消退抗原基因的鉴定

• 批准号: 09770984
• 负责人: 唐 宇飛
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770984/
• 关键词: lcK; HLA-A24; 大腸癌; CTL; 食道癌; キラーT細胞(CTL); HLA classI拘束性

食道癌患者の末梢血からHA拘束性のKE4CTILを誘導し、大量培養した。このHLA-A24拘束性のCTL細胞株をプローブとして、食道癌細胞株およびヒト末梢血単核球のoDNAライブラリーからの自己抗原遺伝子のスクリーニングを遺伝子発現クローニング法にて実施した結果、KE4CTLにより認識される遺伝子を単離した。この遺伝子の塩基配列を決定したところ、srcファミリーのオンコジーンであり膜結合型のチロシンキナーゼであるlckと完全に一致した。発現ベクターに組み込んだlck遺伝子をVA13細胞に遺伝子導入した結果、遺伝子の用量に応じたC化の生物活性が認められたとともに、lck遺伝子産物はKE4CTLによりHLA-A24拘束性に従って認識される抗原であることが確認された。このCTLにより認識されるlck遺伝子産物のHLA-A24分子との結合ペブチドを解析するために、lckタンパク質のアミノ酸配列からHLA-A24分子のパインディングモチーフを検索し、13個のペプチドを合成した。これらのペプチドをHLA上に提示させたところ、3つのペプチド(HYTNASDGL,TFDYLRSVLおよびDYLRSVLEDF)がCTLにより認識されていた。さらに、これらのlck遺伝子産物由来のペプチドが、in vitroにおいて大腸癌患者の末梢血からHLA-A24およびlck遺伝子産物を発現する大腸癌細胞を認識するペプチド特異的なC化を誘導することを確認した。また、このlck遺伝子産物の発現をモノクローナル抗体を用いてウエスタンブロッティング法により検討した結果、大腸癌のほとんどの検体において発現していることを確認した。したがって、lck遺伝子産物由来のペプチドが大腸癌に対する癌ワクチンとして作用する可能性が示唆されることから、臨床応用に向けてさらに検討が必要である。

HA binding KE 4 CTIL in peripheral blood of esophageal cancer patients was induced and cultured in large quantities. The HLA-A24-restricted CTL cell lines were isolated from human esophageal cancer cell lines and peripheral blood mononuclear cells, and their own antigen genes were isolated from human peripheral blood mononuclear cells. The basic arrangement of the molecules is determined by the following: The results of gene introduction into VA13 cells, the amount of gene, and the biological activity of C-protein were identified. The gene product was identified as an HLA-A24 binding antigen. The CTL was able to identify the binding sites of the HLA-A24 molecule and the 13 binding sites. This is the first time that a CTL has been identified with a list of candidates (HYTNASDGL,TFDYLRSVL and DYLRSVLEDF). In addition, the identification of HLA-A24 and LCK gene products in peripheral blood of colorectal cancer patients and the identification of specific C-mutation induction in colorectal cancer cells. The results of this study were confirmed by the use of anti-tumor antibody in the detection of colorectal cancer. It is necessary to investigate the possible role of the gene in colorectal cancer.

项目成果

U.Toh, H.Yamana, etc.: "ESTABLISHMENT OF HLA-CLASS I RESTRICTED AND TUMOR-SPECIFIC CTLs IN PATIENTS WITH ESOPHAGEAL CANCER." Biotherapy. 12(1). 57-61 (1998)

U.Toh、H.Yamana 等：“在食管癌患者中建立 HLA-I 类限制性和肿瘤特异性 CTL。”

U.Toh, H.Yamana, etc.: "HLA Class I-Restricted and Tumor-Specific Cytotoxic T lymphocytes from Metatstatic Lymph Nodes of Esophageal Cancers." Cellular Immunology. 177. 137-143 (1997)

U.Toh、H.Yamana 等：“来自食管癌转移性淋巴结的 HLA I 类限制性和肿瘤特异性细胞毒性 T 淋巴细胞。”

Toh,U.,et al.: "HLA-class-I-restricted and tumor-specific cytotoxic T lymphocytes from metastatic lymphocytes from metastatic lympho nodes of esophageal cancers." Cell.Immunol.177. 137-143 (1997)

Toh,U.,et al.：“来自食管癌转移淋巴结的转移淋巴细胞的 HLA-I 类限制性和肿瘤特异性细胞毒性 T 淋巴细胞。”