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多能性肝幹細胞の同定と分化増殖機構の解明

多能肝干细胞的鉴定及分化增殖机制的阐明

基本信息

批准号：
10770579
负责人：
谷口英樹
金额：
$ 1.34万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

単離した肝細胞集団の中から、多能性を持つ肝幹細胞をFACS(Fluorescence activated cell sorter)とモノクローナル抗体を用いた細胞分離法により濃縮・純化し、それらの機能解析を行うことを目的として研究を行った。まず、in vitro肝幹細胞機能解析系の確立を目的として、マウス胎仔肝細胞の培養系を検討し、1個の細胞を始点とするクローン性コロニーを効率よく誘導可能な培養条件を決定した。そして、このコロニー形成能を指標として、FACSとモノクローナル抗体により画分化したマウス胎仔肝から単離した細胞群の解析を行った。その結果、胎仔肝中の非血球画分であるCD45^-TER119^-細胞から段階的に画分化を進め、最終的にc-Kit^-CD49f^+CD29^+ CD45^-TER119^-細胞中に限定的、かつ、高頻度に増殖能の高いコロニー形成能を有した細胞が存在することが判明した。さらに、それらのクローン性コロニーを拾い上げRT-PCRおよび免疫染色法による細胞系列マーカーの発現の検討を行った。その結果、肝細胞マーカーと胆管細胞マーカーの発現を共に確認した。すなわち、1個のc-Kit^-CD49f^+CD29^+ CD45^-TER119^-細胞から肝細胞と胆管細胞という異なる系列の細胞が分化し得ることを明確に証明した。また、FACSにより分離したc-Kit^-CD49f^+CD29^+CD45^-TER119^-細胞は、in vivoにおいても肝組織再構築能を有することを細胞移植により確認した。これらの結果は、マウス胎仔肝臓中のc-Kit^-CD49f^+CD29^+ CD45^-TER119^-細胞は、高い増殖能、多分化能、組織再構築能を兼ね備えた肝幹細胞(hepatic stem cell)であることを示唆する。すなわち、本研究により、精度の高い肝幹細胞の純化・回収法が世界に先駆けて初めて確立された。これらの成果に関する論文は、現在投稿中である。

The aim of this study is to investigate the effects of Fluorescence activated cell sorter (FACS) on liver stem cell proliferation and its pluripotency. To establish the functional analysis system of liver stem cells in vitro, to establish the culture system of fetal liver cells, to determine the culture conditions of fetal liver cells in vitro, to establish the culture system of fetal liver cells in vitro, and to determine the culture conditions of fetal liver cells in vitro. The analysis of fetal liver cell populations by FACS was performed. As a result, it was found that CD45^-TER119^-cells in fetal liver were differentiated at different stages, and finally c-Kit^-CD49f^+CD29^+ CD45^-TER119^-cells were limited, highly frequent, and highly fertile. The development of cell lines by RT-PCR and immunostaining was discussed. Results: Liver cells and bile duct cells were identified. This is clearly demonstrated by a c-Kit^-CD49f^+CD29^+ CD45^-TER119^-cell differentiation between hepatocytes and bile duct cells. FACS isolation c-Kit^-CD49f^+CD29^+CD45^-TER119^-cells in vivo for liver tissue reconstruction The results showed that c-Kit^-CD49f^+CD29^+ CD45^-TER119^-cells in fetal liver had high proliferation, pluridifferentiation, and tissue remodeling abilities, and were able to prepare hepatic stem cells. The purification and recovery method of liver stem cells with high precision in this study is the first in the world. The results of this paper are now being submitted.