胚性幹(ES)細胞の分化制御による再生医療に関する基礎的研究

控制胚胎干（ES）细胞分化的再生医学基础研究

• 批准号: 14657279
• 负责人: 谷口 英樹
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657279/
• 关键词: ES細胞; 細胞分化; 再生医療

胚性幹(ES)細胞の分化制御による再生医療に関する基礎的研究胚性幹細胞(embryonic stem cell:ES細胞)の肝細胞への分化誘導法を検討し、細胞移植等に必要な規格化された安全性の高い肝細胞を供給可能とし、肝臓の再生治療法を確立することを目的として研究を行った。本年度は、肝実質細胞へ分化の方向性が決定された肝幹細胞(hepatic stem cell)を、ES由来細胞群の中からFACS (fluorescenqe activated cell sorter)を用いた精度の高い細胞分離法により特異的に選別・回収する方法論の確立を試みた。ES細胞をLIF(leukemia inhibitory factor)の非存在下に培養し、胚様体を形成させた後に接着培養を行った。培養20日目以降に、肝細胞系列マーカーであるアルブミンの発現を指標として、FACSを用いた細胞分離を行った。分離・回収したES細胞由来アルブミン陽性細胞は、肝幹細胞に至適な条件下に培養を継続した。すなわち、10%ウシ胎児血清、hepatocyte growth factor (HGF)、epidermal growth factor (EGF)、 oncostatinM (OsM)の存在下でコラーゲンIVコーティングディッシュを用いた接着培養を行った。この培養により、アルブミンやサイトケラチンなどの肝細胞系列マーカーだけでなく、glucose-6-phosphatase、 asiaroglycoprotein receptorなどの肝細胞の後期分化マーカー(成熟マーカー)の発現が確認された。また、形態学的にも成熟肝細胞の特徴とされている2核を有するアルブミン陽性細胞が存在することが判明した。これらの結果から、ES細胞由来アルブミン陽性細胞から成熟した肝細胞が分化誘導されることが示唆されたが、一方ではアンモニア代謝能などの成熟肝細胞機能の発現は確認されておらず、さらなる検討が必要であることも明らかとなった。今後、この肝細胞へ分化しつつある細胞群を選択的に回収するために、FACSによる段階的な細胞分離法を用いた研究を計画する必要がある。

Research on embryonic stem cells (embryonic stem) that are the basis of による regenerative medicine に and する Cell: ES cells) の hepatocellular へ の differentiation candidated を beg し 検, cell transplantation に necessary な normalized さ れ た security の を supply high い liver cells may と し, liver regeneration therapy perforatien の を establish す る こ と を purpose と し を line っ て research た. In this year, the <s:1> and the direction of へ differentiation of liver parenplasmic cells が determined the された hepatic stem cell を and the らFACS (fluorescenqe activated cells) in the ES origin cell population <e:1> The sorter (を) established the を test みた by using the <s:1> た precision <s:1> high-precision <s:1> cell separation method によ and the <s:1> specific に selection and rerelease する methodology <e:1>. ES cells are を cultured in the absence of LIF(leukemia inhibitory factor) <s:1>. After the formation of the embryo form を, に is followed by the subsequent culture of を rows った. Training from 20 mesh に, liver cell series マ ー カ ー で あ る ア ル ブ ミ ン の 発 now を index と し て, both FACS を with い た cell separation line を っ た. Isolate and reproduce the origin of た たES cells ア ブ ブ <s:1> positive cells <e:1> and liver stem cells に to に culture を継続 た た た under suitable な conditions. Youdaoplaceholder0, 10%ウシ fetal 児 serum, hepatocyte growth factor (HGF), epidermal growth factor (EGF), oncostatinM In the presence of (OsM) <s:1>, でコラ, ゲ, <s:1> IV, コ, ティ, グディッシュを, グディッシュを use た た and then cultivate を rows った. こ の cultivate に よ り, ア ル ブ ミ ン や サ イ ト ケ ラ チ ン な ど の liver cell series マ ー カ ー だ け で な く, glucose - 6 - phosphatase, asiaroglycoprotein receptorな <s:1> late differentiation of <s:1> hepatocyte <s:1> カ カ (maturity カ カ) が occurrence が confirmation された. ま た, morphological に も の mature liver cells, 徴 と さ れ て い る 2 nuclear を す る ア ル ブ ミ ン positive cells exist が す る こ と が.at し た. こ れ ら の results か ら, ES cell origin ア ル ブ ミ ン positive cells か ら mature し た が liver cell differentiation induced さ れ る こ と が in stopping さ れ た が, one party で は ア ン モ ニ ア metabolism can な ど の mature liver cells function の 発 は now confirmed さ れ て お ら ず, さ ら な る beg が 検 necessary で あ る こ と も Ming ら か と な っ た. In the future, こ の liver cells へ し つ つ あ る cells を sentaku に back 収 す る た め に, both FACS に よ る Duan Jie な cell separation を with い を た research project す る necessary が あ る.

项目成果

Suzuki A: "In vitro production of functionally mature hepatocytes from prospectively isolated hepatic stem cells"Cell Transplantation. 12. 469-473 (2003)

铃木 A：“从前瞻性分离的肝干细胞中体外生产功能成熟的肝细胞”细胞移植。

谷口 英樹: "肝臓幹細胞.再生医療光学の最先端、〓義人編集"シーエムシー出版. 7 (2002)

谷口英树：“肝脏干细胞。再生医学光学的前沿，Yoshito 编辑”CMC Publishing 7 (2002)。

H.Miyashita, H.Taniguchi et al.: "Evidence for the hepatocyte differentiation from embryonic stem cells in vivo"Cell Transplantation. 11(5). 429-434 (2002)

H.Miyashita、H.Taniguchi 等人：“体内胚胎干细胞分化为肝细胞的证据”细胞移植。

Zheng Y.W: "Deversity of Hepatic Stem Cells in the Fetal and Adult Liver."Seminars in Liver Disease. 23(4). 337-348 (2003)

郑Y.W：“胎儿和成人肝脏中肝干细胞的多样性。”肝病研讨会。

Ishiguro S: "Auxiliary partial orthotopic liver transplantation for fulminant hepatitis : regeneration of the diseased native liver in a pig model"Transplantation. 75(11). 1901-1904 (2003)

Ishiguro S：“暴发性肝炎的辅助部分原位肝移植：猪模型中患病的天然肝脏的再生”移植。