antennapediaタンパクを用いた癌抑制遺伝子産物(蛋白)の癌細胞への直接導入による新しい癌治療法の開発

利用触角蛋白直接将抑癌基因产物（蛋白质）导入癌细胞，开发新的癌症治疗方法

• 批准号: 10770589
• 负责人: 天池 寿
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770589/
• 关键词: 癌抑制遺伝子; p16^<INK4A>; Antennapedia; 細胞老化誘導

筆者らは、これまでにDrosophillaのantennapedia蛋白とサイクリン依存性キナーゼ(cdk)インヒビターの1つであるp16^<INK4A>との融合蛋白(ant-p16)が、不死化細胞株の老化を誘導し、その結果細胞の不可逆的な増殖抑制を誘導することを明らかにした。そして、この成果を癌治療に応用することを目的として本研究を開始したが、融合蛋白の精製法として当初用いたHistidine-Nickelカラムによる精製法は、大量発現の実験系の場合溶液中の融合タンパク質の安定性が著しく低下して、回収率が極めて低下する問題点が明らかとなった。そこで今年度は、まずこの発現ベクターの構築と精製方法について再検討を行い、その結果GST融合タンパクの系を用いることで、比較的安価にかつ安定して大量発現の系でも目的とする融合タンパク質(ant-p16)の回収精製が可能なことを確認した。さらにp16のdeletion mutantとの融合タンパク質の発現系を確立し、昨年度までに明らかにした細胞老化の誘導作用が、確かに活性型p16によるものであることをin vitroの系で確認した(未発表)。現在は、ヌードマウスを用いた癌性腹膜炎モデルの条件検討を行いつつ、ant-p16およびコントロールのmutant ant-p16の大量精製をすすめている段階である。

The author ら は, こ れ ま で に Drosophilla の protein antennapedia と サ イ ク リ ン dependency キ ナ ー ゼ (CDK) イ ン ヒ ビ タ ー の 1 つ で あ る p16 ^ < INK4A > と の fusion protein (ant - p16) が, undead cell lines induced の aging を し, そ の irreversible な の results cells Proliferation inhibition を induces する とを とを in ら ら に に た た. そ し て, こ に cancer therapy is の results を 応 with す る こ と を purpose と し て を began this research し た が の refining method, fusion proteins と し て had used い た Histidine - Nickel カ ラ ム に よ は る refining method, a large number of 発 の now be 験 solution is の occasions の fusion タ ン パ ク qualitative の stability が the し く low し て, back 収 rate が め て Lower する problem point が Ming ら となった となった. そ こ で our は, ま ず こ の 発 now ベ ク タ ー の build と refined methods に つ い て again beg を 検 い, そ の results GST fusion タ ン パ ク の is を with い る こ と で, comparison of Ann 価 に か つ settle し て large 発 の is now で も purpose と す る fusion タ ン パ ク mass (ant - p16) の 収 refined が back may な こ と を confirm し た. さ ら に p16 の deletion mutant と の fusion タ ン パ ク qualitative の 発 now を established し, yesterday's annual ま で に Ming ら か に し た cell aging の entrainment が, indeed か に activity type p16 に よ る も の で あ る こ と を in vitro の is で confirm し た (not 発 table). Now は, ヌ ー ド マ ウ ス を with い た cancerous peritonitis モ デ ル 検 の conditions for line を い つ つ, ant - p16 お よ び コ ン ト ロ ー ル の mutant ant - p16 の lots of refined を す す め て い る Duan Jie で あ る.

项目成果

Kant D,Miyazawa K,Ruas M et al.: "Features of replicative senescence induced by direct addition of antennapedia -p16^<INK4A> fusion protein to human diploid fibtoblasts"FEBS Lett. 427. 203-208 (1998)

Kant D、Miyazawa K、Ruas M 等人：“将触角足 -p16^<INK4A> 融合蛋白直接添加到人二倍体成纤维细胞中诱导复制衰老的特征”FEBS Lett。

Kato D, Miyazawa K, Ruas M et al.: "Features of replicative senescence induced by direct addition of antennapedia-p16^<INK4A> fusion protein to human diploid fibroblasts." FEBS Lett. 427. 203-208 (1998)

Kato D、Miyazawa K、Ruas M 等人：“直接向人二倍体成纤维细胞添加触角足-p16^<INK4A> 融合蛋白诱导复制衰老的特征。”