ケミカルリゲーション法を用いたHIVプロテアーゼ誘導体の合成研究

化学连接法合成HIV蛋白酶衍生物的研究

• 批准号: 10771261
• 负责人: 木村 徹
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771261/
• 关键词: 固相ペプチド合成; ケミカルリゲーション; HIV; HIVプロテアーゼ

HIVプロテアーゼは99アミノ酸よりなるアスパルチックポロテアーゼの一種で,エイズ治療のターゲットとして薬剤が開発され効果をあげている.しかし本酵素は数残基のアミノ酸変異により薬剤耐性を獲得する.そのため耐性の研究に変異プロテアーゼが必要となった.本酵素は主に遺伝子組み替え法により合成されるが,多種類の変異プロテアーゼを得ることは困難である.本研究は近年開発されたケミカルリゲーション法を用いた化学合成により,HIVプロテアーゼ誘導体およびその変異体を合成し,変異プロテアーゼに有効な阻害剤の開発に役立てることを目的とする.本年度は平成10年度の計画1-3によりチオールとアルキルハライドからスルフィド結合を得るケミカルリゲーション法を用いて合成したHIVプロテアーゼ誘導体の活性評価を行った.4 HIVプロテアーゼ誘導体の活性測定 昨年度計画3により得られた高純度のHIVプロテアーゼ誘導体をフォールディングして活性型のダイマーとし,合成基質を用いてその活性を評価した.活性評価はHPLCを用いて,酵素により切断された基質断片の量を定量した.基質として,7残基アミノ酸よりなるペプチド基質(Phe-Proタイプ)と,分子内消光を利用した9残基アミノ酸からなる蛍光基質(Phe-Pheタイプ)の二種類の基質を,Fmoc型固相ペプチド合成法により合成して用いた.合成した酵素は特異的な基質切断能を有していた.5 HIVプロテアーゼ誘導体に対する阻害剤の活性評価 得られたHIVプロテアーゼ誘導体を用い,既存のプロテアーゼ阻害剤(サキナビル,リトナビル,インディナビル,KNI-272等)による阻害活性を測定した.これらの阻害剤に対する感受性は,天然型酵素より低下していた.

HIV treatment is a new type of treatment for HIV infection. The enzyme has a number of residues and is resistant to acid changes. The study of tolerance is necessary. The enzyme is a complex enzyme that is difficult to synthesize. In this study, we have developed a new method for the chemical synthesis of HIV inducer and heterogeneic synthesis of HIV inducer. This year's plan for the 10th year is to use the method of synthesis to evaluate the activity of HIV inducer. 4. The activity of HIV inducer is to determine the activity of HIV inducer. 3. The activity of HIV inducer is to obtain high purity HIV inducer. Evaluation of the activity of synthetic substrates. Activity evaluation: HPLC was used to quantify the amount of enzyme fragments. Matrix: 7 Residues: Acid: Phe-Pro: Phe-Pro: Phe 5. Evaluation of the activity of the inhibitor against the HIV inducer. In the use of the HIV inducer, the activity of the inhibitor against the existing HIV inducer was measured. The sensitivity of the enzyme to the resistance is low, and the natural enzyme is low.

项目成果

Yoshiaki Kiso, Hikaru Matsumoto,Satoshi Yamaguchi & Tooru Kimura: "Design of small peptidomimetic HIV-1 protease inhibitors and prodrug forms."Letters in Peptide Science. 6(5). 275-281 (1999)

木曾芳明、松本光、山口聪