選択的リグニン分解菌の遺伝子工学的解析

选择性木质素降解菌的基因工程分析

• 批准号: 11760124
• 负责人: 本田 与一
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760124/
• 关键词: 担子菌; リグニン; 形質転換; ベクター

本研究は、担子菌Ceriporiopsis subvermisporaのリグニン分解メカニズムの遺伝子工学的な手法を用いた解明と高効率のリグニン分解菌の創出をして、Ceriporiopsis subvermisporaにおける形質転換系の開発、およびリグニン分解酵素遺伝子の解析を行って、その生理学的な役割を明らかにするとともに、リグニン分解に関与する新しいファクターの同定を試みる。また、白色腐朽菌ヒラタケの形質転換系を用いてリグニン分解系の増強された組換え担子菌の作製を試みることを目的とした物である。これまでの研究で開発されたCeriporiopsis subvermisporaのハイグロマシン耐性への形質転換系の安定性やコピー数の解析を行ったところ、染色体内に多数、ランダムに挿入されていて形質の安定なクローンが複数確認された。一方薬剤選択圧非存在下で継代培養することにより、ハイグロマイシン耐性が脱落するクローンも単離された。今後導入DNAの挙動を調査する予定である。また、形質転換効率の上昇を目的として、ハイグロマシン耐性遺伝子のプロモーターをCeriporiopsis subvermisporaのラッカーゼ遺伝子のプロモーターに付け替えた組換え遺伝子を作り、形質転換実験を行ったが、従来のベクターに比べて著しい効率の上昇は観察されなかった。Ceriporiopsis subvermisporaのリグニン分解に関与すると考えられるマンガンペルオキシダーゼアイソザイム遺伝子の単離を行い、複数のクローンを得ており部分的塩基配列を決定した。今後得られた遺伝子を用い、プロモーター等を他の遺伝子由来のものに組み換えることによって、Ceriporiopsis subvermisporaまたはヒラタケ内での酵素の一次代謝での発現を試みる。

In this study, the method of gene engineering of Ceriporiopsis subvermispora was used to solve the problem of high efficiency of gene decomposition bacteria, the development of morphological transformation system of Ceriporiopsis subvermispora, the analysis of gene decomposition enzyme, and the identification of physiological gene decomposition. The white rot fungus has a morphological change system, and the decomposition system is enhanced. This study was conducted to identify the stability and number of chromosomes in Ceriporiopsis subvermispora, and to identify the stability and number of chromosomes in Ceriporiopsis subvermispora. The culture medium was isolated in the presence of a selective medium. The future of DNA transfer is expected to be investigated. The increase in the rate of physical and chemical transformation is aimed at increasing the rate of physical transformation, increasing the rate of resistance to resistance. During the decomposition of Ceriporiopsis subvermispora, the base arrangement of some of the complex sequences is determined by the single sequence of the complex sequences of the complex sequences. In the future, we will try to discover the primary metabolism of the enzyme in the gene, such as the origin of the gene, the composition of the gene, the ceriopsis subvermispora, etc.

项目成果

T.Irie,Y,Honda,T.Watanabe and M.Kuwahara: "Efficient transformation of filamentous fungus Pleurotus ostreatus using single-srand carrier DNA"Appl.Microbiol.Biotechnol.. (accepted). (2001)

T.Irie,Y,Honda,T.Watanabe 和 M.Kuwahara：“使用单链载体 DNA 有效转化丝状真菌平菇”Appl.Microbiol.Biotechnol..（已接受）。

Y.Honda,T.Matsuyama,T.Irie,T.Watanabe and M.Kuwahara: "Carboxin resistance transformation of the homobasidiomycece tungus pleavotus ostreatus."Curr.Genet.. (in print). (2000)

Y.Honda、T.Matsuyama、T.Irie、T.Watanabe 和 M.Kuwahara：“同担子菌菌 tungus plevotus ostreatus 的羧辛抗性转化。”Curr.Genet..（印刷中）。

T.Irie,Y.Honda,T.Watanabe and M.Kuwahara: "Homologous expression of recombinant manganese peroxidase genes in ligninolytic fungus Pleurotus ostreatus"Appl.Microbiol.Biotechnol.. (in print). (2001)

T.Irie、Y.Honda、T.Watanabe 和 M.Kuwahara：“重组锰过氧化物酶基因在木质素分解真菌平菇中的同源表达”Appl.Microbiol.Biotechnol..（印刷中）。

T.Irie,Y.Honda,T.Hirano,T.Sato,H.Enei,T.Watanabe and M.Kuwahara: "Stable transformation of basidiomycete Pleurotus ostreatus to hygromycin B resistance using Lentinus edodes GPD expression signals"Appl.Microbiol.Biotechnol.. (accepted). (2001)

T.Irie、Y.Honda、T.Hirano、T.Sato、H.Enei、T.Watanabe 和 M.Kuwahara：“利用香菇 GPD 表达信号稳定转化担子菌平菇对潮霉素 B 抗性”Appl.Microbiol。