人工的にデザインされたDNA複製オリジンを用いた糸状菌レプリコンの設計

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担子菌類における効率の良い形質転換系を開発するためには、有用なマーカー遺伝子の存在が必要である。本研究では、まずマーカー遺伝子の単離を目的として、抗菌剤フルトラニルに対するヒラタケの耐性突然変異株を用い、耐性遺伝子の単離を試みた。具体的には、まず原生担子菌Ustilago maydisにおいて、カルボキシン耐性の原因遺伝子であると特定されている、ミトコンドリアの内膜酵素コハク酸デヒドロゲナーゼのIpサブユニットの構造遺伝子(sdi遺伝子)を、野生型ヒラタケからクローニングして、塩基配列の決定を行った。次に、紫外線照射処理によって得られたヒラタケのフルトラニル耐性突然変異株からsdi遺伝子をPCRにより増幅し、塩基配列の解析を行った。その結果、これまでに調べられた変異株では、sdi遺伝子のエキソン中にアミノ酸置換を与えるような変異は含まれていないことが明らかになった。したがって、これらの変異株では、フルトラニル耐性を与えている原因遺伝子は、sdi遺伝子以外の遺伝子であることが明らかとなった。現在、その他の変異株のsdi遺伝子について解析を行うとともに、コハク酸デヒドロゲナーゼのFpサブユニットなどほかのサブユニットの遺伝子について解析を行っている。