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遺伝子組換え担子菌を用いた内分泌攪乱物質分解システムの構築

利用转基因担子菌构建内分泌干扰物降解系统

基本信息

批准号：
14042230
负责人：
本田与一
金额：
$ 2.69万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

担子菌類(きのこの仲間)のリグニン分解能力を利用して環境中の内分泌撹乱物質を分解除去する系は、他の生物には見られない多種多様な汚染物質に対して有効な点が特徴である。これは、担子菌の中でも白色腐朽菌類は、一般に菌体外に分泌するラッカーゼやペルオキシダーゼによって初発される連鎖的ラジカル反応によって、高分子リグニンの低分子化を促し、これによって生成する多様な芳香族有機化合物を分解・資化するとされている。このため、白色腐朽菌は多環式・複素環式芳香族化合物や高塩基置換性の芳香族化合物など、バクテリア等では分解が難しい毒性化合物の分解をできることが知られている。本研究では、研究代表者が自ら開発を行ったリグニン分解性担子菌Pleurotus ostreatus(ヒラタケ)への遺伝子導入システムを利用して、内分泌攪乱物質分解能が高度に高められた「遺伝子組換え担子菌」を作製する目的で、高分子基質や非フェノール性芳香族化合物をも直接分解することが可能な、多機能型のマンガンペルオキシダーゼを発現するための組換えmnp2遺伝子を形質転換導入して遺伝子組換え体を単離し、分解能が高められた株のスクリーニングを行った。ヒラタケのmnp2遺伝子を単離して、これまでに作成されたsdi1遺伝子の発現シグナルを有する組換えプラスミドpTM1上で、制限酵素的にコード領域の置き換えを行って組換えプラスミドpIpM2gの構築を行った。この発現プラスミドをP.ostreatusに導入するため、カルボキシン耐性マーカープラスミドpTM1との共形質転換を行った。選択薬剤としてカルボキシン2μg/mlを含む再生培地上でコロニーを作る形質転換体を単離した。これらの形質転換株に対しPCR法による検出を行い、mnp2発現プラスミドpIpM2gも導入された共形質転換株を42株単離した。このようにして得られた株を用いて、培地中に高分子色素PolyR-478を含む培養条件下で多機能型ペルオキシダーゼの生産能についてスクリーニングしたところ、野生型に比べて高い分解能を持つ組換え体が7株見つかった。

The ability of basilar fungi to decompose and remove endocrine disruptors in the environment is characterized by the presence of a variety of pollutants in other organisms. The white rot fungi in Basidiomycetes are generally secreted in vitro, and linked to the production of various aromatic organic compounds, such as those secreted by Basidiomycetes and those secreted by Basidiomycetes. Polycyclic aromatic compounds, aromatic compounds with high substituent, etc. are difficult to decompose and toxic compounds are difficult to decompose This study aims to explore the possibility of direct decomposition of non-aromatic compounds on polymer substrates and by using the enzyme introduction system of the decomposing basidiomycete Pleurotus ostreatus(P. ostreatus). Multi-functional type of cell phone, cell phone The expression of pIPM2 gene was isolated from pIPM1 gene, and the expression of pIPM2 gene was constructed from pIPM1 gene. The development of P. ostreatus in the introduction of the first, second, third and fourth generation of P. ostreatus Select a solvent to remove 2μg/ml of water from the medium. The PCR method was used to detect the presence of pIPM2g in 42 mutant strains. In the culture condition, the multifunctional type can be selected and the production capacity can be increased. In the wild type, the decomposition energy can be increased to 7 strains.