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担子菌類における自律複製型ベクター系の開発-広宿主域プラスミドの宿主非依有性ブライミングシステムの応用

担子菌自主复制载体系统的开发 - 宿主独立的填充系统在广泛宿主范围质粒中的应用

基本信息

批准号：
06856016
负责人：
本田与一
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06856016/
关键词：
担子菌ベクター分子生物学

项目摘要

担子菌類におけるベクター系は、P.chrysosporiumにおける効率の低い、組込み型の例など少数が知られているのみである。1993年、Auburn大のPengらは、ヒラタケをハイグロマイシン耐性のDNAを用いて形質転換したところ、ゲノム由来の約1.1kbのDNA断片を含み、自律的に複製していると考えられるプラスミドを得たと報告した(Peng,M.,Lemke,P.A.and Singh,N.K. (1993) Curr.Genet.24 114-122)。このプラスミドに改良を与え、μgDNAあたり10^5以上の形質転換効率を実現できるならば、shotgun cloningが可能になると考えられる。これは、酵母で利用されているような分子遺伝学的手法が、担子菌類においても利用可能になることを意味するものである。◆Pengらの得た自律複製プラスミドを試料請求したが、返答はなかった。◆そこで、Pengらが形質転換に用いたベクターと同様のものを自ら構築して、ヒラタケに形質転換することとし、この目的に叶うベクターを準備した。◆ヒラタケ二核菌糸体からプロトプラストを調製し、準備されたベクターDNAの形質転換を行ったところ、マーカーとして用いたハイグロマイシン耐性を示すコロニーが得られた。現在これらの菌糸体内に含まれる外来DNAの挙動について解析中である。◆これとは別に、5FOAを用いた選抜法によりヒラタケのuracil要求株を単離すべく、単核菌糸体の単離、突然変異の誘発を試みている。

A few species of basidiomycete, P. chrysosporium, have been identified. In 1993, Auburn University's Peng Shi, Peng Shi. Lemke,P.A.and Singh,N.K. (1993) Curr.Genet.24 114-122)。This is the first time that a person's DNA has been cloned. This means that yeast can be used in molecular genetics, and basidia can be used in molecular genetics.◆Peng's self-discipline copy request is returned. In addition to the above, the author also pointed out that it is necessary to improve the quality of the products. In addition, it is necessary to prepare for the transformation of DNA and to prepare for the transformation of DNA. Now the bacteria contain foreign DNA in their bodies. The method of selection for 5FOA requires isolation of strains, isolation of bacteria, and sudden change of induction.