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担子菌のリグニン分解酵素系の分子生物学的解析と自律複製型ベクターの開発

担子菌木质素降解酶系统的分子生物学分析及自主复制载体的开发

基本信息

批准号：
07760086
负责人：
本田与一
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760086/
关键词：
担子菌リグニン分解ベクターフルトラニルマーカー遺伝子

项目摘要

1. MnP遺伝子のクローニング種々のペルオキシダーゼ間で、局部的に保存されているアミノ酸配列を元に混合プライマーを合成し、ヒラタケの染色体DNAを鋳型にしてPCRを行なって、特異的に増幅されるDNA断片をクローニングした。塩基配列を決定したところ、P. chrysosporiumのMnP遺伝子とアミノ酸レベルで60%程度の相同性を持ち、互いに酷似した複数のクローンが得られた。これらのクローンは、ヒラタケのMnP酵素群の遺伝子ファミリーであると考えられる。これらのクローンのうち代表的な1つのクローンをPOP1と名付け、ヒラタケゲノムライブラリーからサザンハイブリダイゼーションによりスクリーニングを行なったところ、約15000個の1クローンの中から、56個の陽性クローンを得た。これは単核体あたり、約10個の遺伝子ファミリーが存在していることを示すものである。現在、塩基配列の決定を行いN末端のアミノ酸配列情報により、MnPアイソザイムとの照合を行なっている。2.高形質転換効率ベクターの構築担子菌類で有用なベクターの構築の際に必須の前提条件となる、優性のマーカー遺伝子を単離するため、種々の薬剤に対する耐性を調査した結果、カルボキシアミド系の抗菌剤フルトラニルが野生型のヒラタケの成長を特異的に阻害することが明かになった。そこで突然変異処理を行うことによってフルトラニルに耐性の優性の遺伝形質を与える変異株を多数単離し、その性質を調べた。それらの中で耐性度の強かったMA206株から抽出した全DNAを用いて野生型のヒラタケを形質転換処理したところ、薬剤添加培地上で成育可能な複数のコロニーが単離された。現在、これらのクローンのDNAレベルでの解析を行っている。

1. Chromosome DNA from MnP gene was typed and amplified by PCR, and DNA fragments from MnP gene were isolated and partially preserved. The base alignment of P. chrysosporium is determined by the degree of identity of 60%, and the similarity of P. chrysosporium to MnP is determined by the degree of similarity of 60%. This is the first time I've ever seen a woman who's been in a relationship with a man. About 15000 of the 1,000 entries in POP1, POP2, POP3, POP4, POP5, POP6, POP7, POP8, POP9, POP9, POP There are about 10 genes in the nucleus. Now, N-terminal amino acid alignment information in the determination of base alignment, MnP amino acid alignment and alignment. 2. The results of the investigation on the prerequisite conditions, the optimal selection and the resistance of the species to the resistance of the fungi with high morphological conversion efficiency, the specific inhibition of the growth of the wild-type fungi by the antibacterial agent of the fungi with high morphological conversion efficiency, and the specific inhibition of the growth of the wild-type fungi. The characteristics of the plant are different from those of other plants, and the characteristics of the plant are different. The resistance of MA206 strain was strong, and the whole DNA was extracted from MA206 strain. The wild type was transformed into the wild type. The wild type was transformed into the wild type. Now, the DNA analysis of the virus has been carried out.