ヒト黄体細胞のホルモン産生とアポトーシスの調節機構の解明:ヒト顆粒膜黄体細胞株の樹立とこれを用いた検討

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当該研究者はそれぞれcAMPまたはFSH刺激にてプロゲステロン(P4)を産生するヒト黄体化顆粒膜細胞株HO-23とHRP53-10を樹立した。これらを用い、以下のことを検討した。1 卵巣内諸因子による黄体細胞のステロイド産生調節卵巣内諸因子のうち基底膜を含む細胞外マトリックス成分(ラミニン、フィブロネクチン、タイプIコラーゲン、タイプIVコラーゲン、エンタクチン、ヘパラン硫酸プロテオグリカン)と成長因子(EGF,bFGF)がP4産生にどのような影響を与えるか調べた。まず細胞内ステロイド産生機序がより単純であるHO-23を用いて実験したところ、P4産生はラミニン存在下で抑制され、ヘパラン硫酸プロテオグリカン存在下で促進された。フィブロネクチン、タイプI及びタイプIVコラーゲンの各存在下では明らかな変化はなかった。EGF投与では産生に変化がなかったのに対し、bFGF投与では著明に抑制された。このような各因子によるP4産生調節の違いについて、現在P450scc、Steroidogenic acute regulatory protein(StAR)など細胞内ステロイド調節因子の発現を調査中であり、HRP53-10細胞においても検討する予定である。2 卵巣内諸因子による黄体細胞のアポトーシス調節培養温度の変化によりp53が活性化されアポトーシスに陥るというHO-23の性質を利用し、上記諸因子が黄体細胞のアポトーシスをどのように調節するかフローサイトメーターを用いて検討した。結果、フィブロネクチン、タイプI及びタイプIVコラーゲン、ヘパラン硫酸プロテオグリカンの各存在下でHO-23のアポトーシスは抑制された。bFGFの存在下でもアポトーシスは抑制され、このときp53を中和するMdm2タンパクの発現亢進がみられた。HRP53-10はcAMP刺激にてアポトーシスを誘導するが、このときMdm2やp21などp53に関連するタンパクの発現はむしろ抑制された。従って今後p53とは別のアポトーシス誘導機序の関与を検討する必要がある。