口腔癌細胞におけるPTHrP遺伝子の活性型ビタミンDによる転写調節の機構

活性维生素D对口腔癌细胞PTHrP基因转录调控的机制

• 批准号: 11771164
• 负责人: 阿部 匡聡
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Ohu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771164/
• 关键词: 口腔癌細胞; PTHrP; プロモーター; ルシフェラーゼアッセイ; 活性型ビタミンD; レチノイン酸

Northern blot解析により、all trans-retinoic acid(tRA)は、口腔癌細胞HSC-3のPTHrP mRNA発現を用量依存的に抑制することが明らかとなった。さらに、HSC-3細胞から培地へのPThrP分泌もtRAにより用量依存的に抑制された。また、HSC-3細胞をtRA(10^<-7>M)で24h処理し、DRBを添加した後のPTHrP mRNA発現量の経時変化を調べたところ、コントロール群と比較して有意な差異はみられなかった。これより、tRAはPTHrP mRNAの安定性には影響を与えないことが判った。次に、ヒトPTHrP遺伝子の下流側プロモーター(P2/P3)の領域を含む1368bpの遺伝子フラグメント(P3の転写開始点を+1として-1353〜+15bp)をルシフェラーゼベクター(PGV-B2)の上流に組み込んだレポータープラスミドを作成し、リポフェクション法によりHSC-3細胞にトランスフェクションした。ルシフェラーゼアッセイの結果、1,25-dihydroxyvitamin D_3(1,25(OH)_2D_3)(10^<-8>M)を48h作用させた細胞では転写活性の有意な低下が認められた。また、プロモーターの上流側の領域を欠失させた3種類のdeletion construct(-937〜+15,-773〜+15,-476〜+15)を作成した。現在、これらのconstructを用いて、1,25(OH)_2D_3による負の応答領域の検索を行っている。

Northern blot analysis showed that all trans-retinoic acid(tRA) inhibited the expression of PTHrP mRNA in oral cancer cells HSC-3 in a dose-dependent manner. In this study, HSC-3 cells were cultured and their PThrP secretion was inhibited in a dose-dependent manner. The expression of PTHrP mRNA in HSC-3 cells <-7>after 24h of treatment and DRB addition was significantly different from that in HSC-3 cells after 24 h of treatment. PTHrP mRNA stability is affected by the presence of tRA. In addition, the downstream side of the PTHrP gene (P2/P3) domain contains a 1368bp gene sequence (P3 start point +1 to-1353 to +15 bp). The upstream side of the PTHrP gene (PGV-B2) is composed of a sequence of sequences and sequences. 1,25-dihydroxyvitamin D_3(1,25(OH)_2D_3)(10^<-8>M) was added to the cells for 48h. 3 types of deletion constructs (-937 ~+15,-773 ~+15,-476 ~+15) are created. Now, the construction of the negative response domain is in use, 1,25(OH)_2D_3 is in use.

项目成果

Masatoshi Abe: "Induction of collagenase-2 (matrix metalloproteinase-8) gene expression by interleukin-1βin human gingival fibroblasts."Journal of Periodontal Research . (in press). (2001)

Masatoshi Abe：“人牙龈成纤维细胞中白细胞介素 1β 诱导胶原酶 2（基质金属蛋白酶 8）基因表达。”牙周研究杂志（2001 年出版）。