線虫における液胞型ATPaseの役割とクロライドイオンによる調節

液泡 ATP 酶在秀丽隐杆线虫中的作用及氯离子的调节

• 批准号: 11780445
• 负责人: 岡 敏彦
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780445/
• 关键词: 液胞型ATPase; クロライドイオン

本年度の研究行なった。具体的には以下の示す。1)新たな線虫V-ATPase遺伝子の同定本研究では、V-ATPaseの作り出す多様な酸性環境の役割を明らかにするために、複数存在するV-ATPaseサブユニットのアイソフォームに着目し、アイソフォームが酸性環境の多様性にどう影響しているかを理解しようとしている。そのために、線虫でアイソフォーム遺伝子の欠損変異体の作成、解析を行い、その構築している酸性環境を同定することを目指している。そのために、線虫のデータベースより、V-ATPaseサブユニットaに似たESTクローンを検索し、4種類のクローンを同定した。ESTクローンと5'-RACE法で得られたPCR産物の塩基配列を決定し、全長のcDNAの配列を明らかにした。これかV-ATPaseサブユニットaイソフォーム遺伝子(vha-5,vha-6,vha-7,unc-32)は、それぞれ873,865,966,894アミノ酸残基より成るタンパク質をコードしていた。2)線虫V-ATPase変異体の構築平成12年度は、新らたに同定したV-ATPaseサブユニット遺伝子)の欠損変異体の構築を目指した。まず2本鎖RNA(dsRNA)を用いたRNA interference法により一時的にvha遺伝子の発現を遮断し、目的とする欠損変異体の表現型を解析した。vha-5遺伝子のdsRNAを成虫に導入することにより、その子孫が2令幼虫期で死滅したことから、vha-5遺伝子が線虫の3令幼虫への発生に重要な役割を担っていることが示唆された。また、vha-6やunc-32遺伝子のdsRNAを導入すると、1令幼虫や胚の段階で発生が押さえられ死滅することが分かった。vha-7遺伝子のdsRNA導入では子孫に何の変化も見られなかった。これら原因としては、それぞれの発生段階で特異的なサブユニット構成のV-ATPaseの活性が必要とされていることが推定される。現在は、これら遺伝子の機能欠損による致死の原因を分子レベルで検討中である。

Youdaoplaceholder0 research line for this year. The specific に に is shown below す. 1) new た な nematodes V - ATPase posthumous son 伝 の with these studies で は, V - ATPase の り out す made more others cut を な acidic environment の service Ming ら か に す る た め に, plural す る V - ATPase サ ブ ユ ニ ッ ト の ア イ ソ フ ォ ー ム に mesh し, ア イ ソ フ ォ ー ム が acid environment の multiple others に ど う influence し て い る か Youdaoplaceholder0 understand ようと ようと て る る. そ の た め に, nematodes で ア イ ソ フ ォ ー ム heritage 伝 の son owe loss - variants, parsing の を い, そ の build し て い る を acidic environment with constant す る こ と を refers し て い る. そ の た め に, nematodes の デ ー タ ベ ー ス よ り, V - ATPase サ ブ ユ ニ ッ ト に like a た EST ク ロ ー ン を 検 cable し, 4 species の ク ロ ー ン を with fixed し た. EST ク ロ ー ン と 5 '- RACE method to で ら れ の た PCR products salt base length column を decided し, の cDNA の match column を Ming ら か に し た. こ れ か V - ATPase サ ブ ユ ニ ッ ト a イ ソ フ ォ ー ム heritage 伝 son (our client - 5, our client - 6, 7, our client - unc - 32) は, そ れ ぞ れ 873865966894 ア ミ ノ acid residues よ り into る タ ン パ ク qualitative を コ ー ド し て い た. 2) nematode V - ATPase - variant の build pp.47-53 12 は, new ら た に with fixed し た V - ATPase サ ブ ユ ニ ッ ト heritage 伝) の owe loss - variant の build を refers し た. ま ず 2 this lock RNA (dsRNA) を い た RNA interference method に よ り に the whim of the moment our client's heritage 伝 son の 発 を interrupt し now, purpose と す る owe loss - variant の phenotype を parsing し た. Traces of our client - 5 伝 son の dsRNA を adult に import す る こ と に よ り, そ の sons が 2 to larval stage で die out し た こ と か ら, our client - 5 but 伝 が nematodes の 3 makes larvae へ の 発 raw cut を bear important な に service っ て い る こ と が in stopping さ れ た. ま た, our client - 6 や unc - 32 heritage 伝 son の dsRNA を import す る と, 1 larvae や embryo の Duan Jie で 発 raw が detain さ え ら れ die out す る こ と が points か っ た. The 伝 offspring of vha-7, <s:1> dsRNA, were introduced into the で で descendants, に he, <s:1>, transformed and found in られな った った. こ れ ら reason と し て は, そ れ ぞ れ の 発 raw Duan Jie で specific な サ ブ ユ ニ ッ ト constitute の V - ATPase activity の が necessary と さ れ て い る こ と が presumption さ れ る. Now, the を molecules, レベ, で検 and で検 are discussing the である causes of による death due to the deficiency of <s:1> function in れら and れら.

项目成果

Futai et al.: "Lumenal acidification of diverse organelles by V-ATPase in anisole cells"J. Exp. Biol.. 203. 107-116 (2000)

Futai等人：“苯甲醚细胞中V-ATP酶对多种细胞器的腔内酸化”J。

Toyomura et.al: "Three Subunit a isoform of mouse vacuoler Ht ATPase: Preferential expression of the a3 isoform during osteoclust differentiation"J. Biol. Chem. (印刷中).

Toyomura 等人：“小鼠液泡 Ht ATP 酶的三个亚基 a 亚型：破骨细胞分化过程中 A3 亚型的优先表达”J. Biol。

Petal corin et al.: "Disruption of clh-l, a chloride channe gene, results in a wider body of Cachorbaditis elegans"J, Mol. Biol.. 294. 347-355 (1999)

Petal corin 等人：“氯通道基因 clh-1 的破坏会导致更大范围的秀丽隐杆线虫”J，Mol。